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目的:研究水飞蓟宾对体内外高脂诱导的NAFLD模型的脂质沉积及miR-122表达的干预作用,并探讨其可能的机制。方法:体内实验:7周龄C57BL/6JC小鼠36只,适应性喂养1周后随机分为2组:对照组(normal diet,ND)12只,高脂组(high fat diet,HFD)24只。ND组给予普通饲料喂养,HFD组给予高脂饲料喂养。4周后再将HFD组随机分为HFD组和HFD+SIL组各12只,HFD+SIL组每天灌胃水飞蓟宾54mg/kg体重,ND组和HFD组灌胃等体积生理盐水。药物干预4周后,行IPGTT检测各时间点血糖值并计算葡萄糖曲线下面积。采集血清标本检测空腹血糖。ELISA法检测空腹血清胰岛素。采集肝组织标本检测甘油三酯含量。肝组织HE染色和油红O染色观察肝组织病理学改变。提取小鼠肝组织miRNA及总RNA,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测小鼠肝组织中miR-122的表达。RT-PCR、Western Blotting检测小鼠肝组织中脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)的mRNA和蛋白表达。体外实验:将HepG2细胞随机分为对照组(Con)、棕榈酸干预组(PA,含0.25mmol/L棕榈酸培养基)和水飞蓟宾干预组(PA+SIL,水飞蓟宾浓度25μM),干预48h后收集细胞,测定各组HepG2细胞甘油三酯含量;油红O染色观察细胞内脂质沉积程度;提取HepG2细胞miRNA及总RNA;RT-PCR检测HepG2细胞miR-122的表达;RT-PCR、Western Blotting检测FAS、ACC、CPT1A的mRNA表达及蛋白表达。此外,棕榈酸培养的HepG2细胞转染miR-122 mimic后,加以水飞蓟宾干预,RT-PCR、Western Blotting检测FAS、ACC、CPT1A的mRNA表达及蛋白表达。结果:体内实验:1各组小鼠空腹血糖、空腹胰岛素、腹膜下葡萄糖耐量实验结果比较:三组小鼠空腹血糖、空腹胰岛素无统计学差异(P>0.05);HFD组15 min、30min、60min、120min血糖值均较ND组显著升高,血糖曲线下面积(AUC)明显增加(P<0.05);HFD+SIL组15min、30min、60min、120min血糖均较HFD组显著降低,血糖曲线下面积(AUC)明显减少(P<0.05)。2水飞蓟宾对高脂喂养小鼠肝脏脂质沉积的影响2.1各组小鼠肝脏TG含量比较:与ND组比,HFD组肝脏TG含量明显增加(P<0.01),HFD+SIL组肝脏TG含量较HFD组明显减少(P<0.01)。2.2肝脏组织病理学检测结果比较2.2.1 HE染色:ND组肝组织结构完整,肝细胞排列整齐,肝小叶规则,胞质均匀,未见明显炎症细胞和脂肪变性。HFD组肝小叶结构紊乱,肝细胞肿胀,肝细胞胞浆内可见大量脂滴空泡,气球样变明显,汇管区及小叶内有大量炎细胞侵润,HFD+SIL组肝细胞炎症细胞浸润减少,脂肪变性程度显著减轻。2.2.2油红O染色:ND组未见明显脂滴,HFD组有大量脂滴,HFD+SIL组脂滴明显减少。3各组小鼠肝脏miR-122的表达:与ND组比,HFD组miR-122表达明显增加(P<0.01);与HFD组比,HFD+SIL组miR-122表达明显减少(P<0.01)。4各组小鼠肝脏FAS、ACC和CPT1A的mRNA及蛋白水平比较:与ND组比,HFD组FAS、ACC的mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),CPT1A的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01);与HFD组相比,HFD+SIL组FAS、ACC的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01),CPT1A的mRNA及蛋白表达增加(P<0.01)。体外实验:1水飞蓟宾对棕榈酸培养的HepG2细胞脂质沉积的影响1.1 HepG2细胞内TG含量变化:与Con组比,PA干预后HepG2细胞内TG含量明显增加(P<0.01);与PA组比,PA+SIL组TG含量明显降低(P<0.01)。1.2油红O染色结果:Con组细胞无明显脂滴,PA组细胞有大量红染脂滴,PA+SIL组脂滴明显减少。2水飞蓟宾对HepG2细胞miR-122表达的影响:与Con组相比,PA干预组的miR-122表达升高(P<0.01);与PA组相比,PA+SIL组miR-122表达下降(P<0.01)。3水飞蓟宾干预对棕榈酸培养的HepG2细胞FAS、ACC和CPT1A的mRNA及蛋白水平的影响:与Con组比较,PA组FAS、ACC的mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),并且CPT1A的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01);与PA组比,PA+SIL组FAS、ACC的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01),并且CPT1A的mRNA及蛋白表达增加(P<0.01)。4 HepG2细胞转染miR-122mimic后水飞蓟宾对FAS、ACC和CPT1A的mRNA及蛋白表达的影响:与Con组比较,PA组FAS、ACC的mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),CPT1A的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01);与PA组比,PA+SIL组FAS、ACC的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01),CPT1A的mRNA及蛋白表达增加(P<0.01);转染miR-122 mimic后,与PA+SIL组比,PA+SIL+miR-122 mimic组FAS、ACC的mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),CPT1A的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01)。结论:1.水飞蓟宾可以改善体内外高脂诱导的NAFLD模型的脂质沉积。2.高脂诱导肝细胞脂质从头合成通路激活,抑制脂肪酸氧化,而水飞蓟宾抑制脂质从头合成,增加脂肪酸氧化。3.高脂可引起小鼠肝脏和HepG2细胞miR-122的表达增加,水飞蓟宾可以下调miR-122的表达。4.水飞蓟宾是通过下调miR-122的表达而减少脂质从头合成,并增加脂肪酸氧化,改善体内外高脂诱导的NAFLD模型的脂质沉积。