成纤维细胞生长因子19(FGF19)是回肠上皮细胞分泌的细胞因子,进入循环系统后与相应靶组织受体结合,主要功能是调节肝脏的胆汁酸合成和糖异生,同时促进肝脏的糖原和蛋白质合成。FGF19对胆汁酸平衡及靶组织的糖脂代谢调节作用,使其成为非酒精性脂肪肝、2型糖尿病及代谢综合征等疾病的研究靶标。目前研究表明多种疾病状态下FGF19的表达水平都会发生异常,但具体调节机制尚不清楚。本课题主要探究FGF19转录调控的关键结合元件及其调节机制,通过构建启动子区荧光素酶报告基因质粒,筛查转录调控的关键区域,进而研究该关键区域的具体转录调控机制,可为代谢相关疾病的研究提供一定基础。目的研究表明多种代谢相关疾病伴有FGF19表达水平异常,可见FGF19的表达对于机体病理生理状态的调节作用不容忽视,但目前有关FGF19的转录调控机制尚不完全清楚,本研究旨在进一步分析FGF19基因的启动子活性,并揭示FGF19启动子区重要的结合元件及其可能的转录调控机制。方法构建一系列FGF19启动子区荧光素酶报告基因质粒,转染HepG2细胞后分析不同FGF19基因启动子区活性变化,利用在线预测软件对转录活性变化明显的启动子区进行分析,预测潜在的转录因子结合位点,同时构建点突变的报告基因质粒,分析转录因子结合位点改变对的FGF19基因启动子活性的影响,电泳迁移率变动分析法(EMSA)验证转录因子与启动子区的体外结合。结果1.成功构建一系列FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒。2.在HepG2细胞中进行荧光素酶活性检测,验证FGF19基因启动子区-2351~-2316是调控其转录活性的关键区域。3.利用Gene Regulation软件对启动子区进行分析,预测启动子区-2351~-2316间碱基序列的潜在转录因子。4.-2236和-2252单核苷酸多态性位点(SNP)的碱基突变对FGF19基因启动子活性有明显影响,同样利用Gene Regulation软件预测SNP位点结合的转录因子,EMSA验证顺式作用元件与反式作用因子的特异结合。结论FGF19基因启动子区-2351~-2316是调控FGF19基因转录活性的关键区域,-2236和-2252两个单核苷酸多态性位点参与调控FGF19基因启动子活性,且-2236位点所在的碱基序列可结合糖皮质激素受体(GR)转录因子调控FGF19的启动子活性。