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本文主要从以下几部分进行讨论： 第一部分 血清甘油三酯参考物质互通性评价 目的:本研究旨在研究室间质量评价物质，甘油水溶液以及市售参考物质（包括校准物和质控物）等制备物的互通性，以及血清甘油三酯常规检测系统（方法）的准确性。 方法:根据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)批准指南CLSI EP14-A2和EP9-A3，本研究采用同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定总甘油的方法作为参考方法，14个常规甘油三酯试剂盒（总甘油法）及其配套校准品在日立7180自动生化分析仪的测试方法作为常规检测方法，共同测定43份人新鲜血清和32种制备物的总甘油。制备物包括冻干质控品，混合人血清，液体质控品，动物血清以及甘油水溶液等。将参考方法和常规方法测定的人新鲜血清中的总甘油结果作散点图，参考方法的测定结果作为X轴，各常规检测方法测定结果作为Y轴，进行最小二乘法直线回归分析，根据拟合直线的方程计算得到Y理论值双侧95％的预测区间，根据制备物测定结果是否落在回归直线方程的95％预测区间内，评价制备物的互通性问题。计算每个常规检测系统的相对偏倚，结合各自的变异系数(CV)，计算每个测试的总误差，以我国卫生行业标准规定WS/T403-2012允许偏倚(＜5％)和总误差(＜14％)作为评价标准评价各系统的正确度和准确度。 结果:14个常规检测系统的平均CV＜2％，与参考方法的相关系数r＞0.99（除D系统，r=0.9883）。互通性评价结果显示，冰冻人血清和动物血清在所有的检测系统上都是互通的。某些EQA/PT物质，市售校准物以及其他质量控制物质在一些常规检测系统上表现出不同的基质效应，2013年常规化学室间质量评价质控品在部分常规系统大多表现负基质效应，2013年脂类室间质量评价质控品仅有个别标本上在D检测系统上表现为正基质效应，四种市售校准品中的两种在某些常规检测系统上表现为负基质效应。2013年脂类正确度验证的两个水平的样本在所有检测系统中也是互通的。四种市售质控品中各有一个水平的质控品在一些系统上表现出基质效应。水溶液在常规检测系统上普遍不具有互通性，基质相关偏倚较大。14个常规检测系统测定43份新鲜冰冻血清中总甘油的平均偏倚为-0.19mmol/L～0.21mm ol/L（-9.51％～11.08％），两个医学决定水平上即2.26mmol/L和5.65mmol/L的预期偏倚分别为-0.23mmol/L～0.26mmol/L（-10.55％～11.42％）和-0.59mmol/L～0.65mmol/L(-11.10％～11.67％)。不少于2/3的检测系统能够满足我国行业标准WS/T403-2012偏倚的要求(＜5％);除了D系统外，其他13个系统在检测43例的人新鲜冰冻血清总计86个结果中，不满足我国行业标准允许总误差的要求(TE＜14％)的个数不超过3个，D检测系统则超过了10个。 结论:制备物的基质效应和系统的校准偏倚是存在于血清甘油三酯常规检测中。因此各方面仍需要努力提高检测的准确度和结果的可比性，生产试剂或校准品的生产商需要关注校准品的溯源链是否完整;使用试剂和校准品的临床实验室或室间质量评价或能力验证计划的提供机构对质控物、校准物等制备物的互通性应进行确认。 第二部分 血清三碘甲腺原氨酸液相色谱质谱测定方法研究 目的:本研究探索液相色谱质谱测定血清三碘甲腺原氨酸方法的样品制备，质谱检测参数以及色谱分离条件，初步建立同位素稀释液相色谱串联质谱检测三碘甲腺原氨酸方法。 方法:本研究对LC-MS/MS测定血清T3的样品制备、色谱质谱条件进行系列试验和优化，建立如下分析过程。采用同位素稀释法原理，选择T3-13C6作为同位素内标，重量法准确称量样品质量和同位素内标的质量，使用电喷雾离子源(ElectronSpray Ionization，ESI)正离子多反应监测(Multiple Reaction Monitor, MRM)模式，检测离子对的转变为m/z652.0/606.0(T3)和657.8/612.0(T3-13C6)。依据质谱检测得到标准溶液和样品中T3与内标的峰面积比值，通过公式计算得到样品的T3浓度。样品处理过程包括用含0.1％甲酸的甲醇沉淀血清蛋白质，离心后取上清进行固相萃取（Solid Phase Extraction，SPE），进一步分离，纯化，富集T3，收集洗脱溶液，氮气吹干，用流动相重组后进行LC-MS/MS检测。本研究评价了方法的检测限(Limits of Detection，LOD)，定量限（Limits of Quantification，LOQ），精密度，回收率等。 结果:建立的固相萃取条件可有效纯化、富集T3，满足LC-MS/MS分析需要;建立的色谱质谱条件可特异检测T3，未见明显系统误差因素。本研究中液相色谱分离柱采用ZORBAX Eclipse XDB C18色谱柱，流动相为35％水（含有0.05％甲酸，PH=3），65％甲醇，流速0.3mL/min，柱温30℃，检测时间为7min，可实现T3与反式T3，T3与T4的良好分离。方法的检测限和定量限分别为0.25nmol/L和0.72nmol/L，批内CV的范围是0.40％～9.90％，批间CV的范围是4.35％～16.93％，总CV的范围是5.87％～15.47％，相对回收率为96.74％～105.27％。 结论:本研究摸索了液相色谱质谱法测定T3主要分析条件，初步建立了血清T3液相色谱质谱检测方法，进行了方法的初步确认。方法仍需进一步完善，方法应用和T3稳定性的问题等尚需进一步研究。