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目的:研究胚胎发育不同时期胆总管壁细胞凋亡与增殖情况;不同类型(囊状、梭状型)胆总管囊肿内胆汁淀粉酶与囊肿壁细胞凋亡与增殖变化关系,了解胆汁淀粉酶对囊肿壁细胞凋亡与增殖变化的影响;了解细胞凋亡与增殖在胆总管囊肿中的作用。为阐明胆总管囊肿的发病机制及其防治提供依据和途经。
方法:(1)胎儿组:取不同胎龄(6、7、8、9、10月)人工流产胎儿胆总管标本各5例;(2)从我院肝胆小儿外科1995.1.~2000.12.住院病人中,通过相应检查排除其他疾病,按临床检查(USCT)及手术发现分以下三组,囊状扩张组32例,梭状扩张组35例,对照组:胆总管结石致胆管扩张25例。术中测量三组胆管(囊肿)直径;经胆管前壁抽取胆汁,碘-比色法检测胆汁淀粉酶;取部分胆管壁送检,观察胆管壁损伤情况。(3)上述各组均经光镜下观察病理变化,免疫组织化学法检测细胞凋亡相关指标bcl-2、bax及细胞增殖指标PCNA表达情况;TUNEL法检测细胞凋亡情况。
结果:(1).光学显微镜下所见:胎儿胆管上皮组织完整,多为柱状上皮细胞,可见少量平滑肌细胞分布于纤维组织层中,随胎龄增长纤维层增厚,无明显炎症反应。囊状扩张组粘膜上皮细胞破坏严重,无明显的再生修复,上皮组织消失或仅有少量残留,囊壁增厚,拌有纤维组织增生,肌纤维断裂明显,随病程延长而加重。
梭状扩张组镜下所见与囊状扩张组相似,但程度较轻。对照组胆总管组织呈慢性炎症,管壁神经增生明显。纤维增生无胆管囊肿明显,伴有少量肌纤维断裂。
(2)bcl-2、bax、PCNA的表达及细胞凋亡的检测:胚胎发育的6、7、8、9、10月胆总管上皮均存在细胞凋亡与增殖,6个月胎儿胆总管上皮细胞凋亡率、增殖指数及BAX的阳性率最高,而bcl-2的阳性率最低,随胎龄的增加胆总管上皮细胞凋亡率、增殖指数及BAX的阳性率逐渐降低,bcl-2的阳性率随胎龄的增加逐渐升高,胆总管上皮细胞凋亡率、增殖指数在各月份之间有差异性(p<0.05)。对照组中凋亡细胞呈散在分布,凋亡细胞阳性率较低;bcl-2、bax表达率较低,水平相当;PCNA表达率较高。囊状扩张组与梭状扩张组:囊壁残留上皮中bcl-2、PCNA表达率低,bax表达率高,bax的阳性率明显高于bcl-2,凋亡细胞阳性率较高;成纤维细胞中bcl-2、PCNA表达率较高,bax表达率较低,bcl-2的阳性率明显高于bax,凋亡细胞阳性率较低。两组之间无明显差异。两组bcl-2、bax的表达与对照组有明显差异。
(3)胆汁淀粉酶、囊肿直径变化:囊状扩张组胆管扩张最明显,其次为梭状扩张组,两者之间有明显差异,两者均较对照组明显扩张,囊状扩张组与梭状扩张组囊内淀粉酶均较对照组明显升高,梭状扩张组更为明显,两组之间也有差异性;囊状扩张组囊肿直径与囊内胆汁淀粉酶浓度成负相关,梭状扩张组直径与淀粉酶浓度成正相关。
(4)胆管破坏程度与胆汁淀粉酶、直径及细胞凋亡程度的关系:无论是囊状扩张组还是梭状扩张组胆管破坏程度、直径与细胞凋亡程度皆成正相关。
结论:1、正常胆管壁由粘膜层、很簿的固有层、纤维肌层和外膜层构成。胚胎发育的6、7、8、9、10月胆总管上皮均存在细胞凋亡与增殖,随胎龄的增加胆总管上皮细胞凋亡率、增殖指数及BAX的阳性率逐渐降低,bcl-2的阳性率逐渐升高。提示细胞凋亡与增殖的动态平衡在正常胆管发育过程中起着重要作用。
2、胆总管囊肿时,胆管壁破坏明显,粘膜层破坏严重,粘膜上皮残缺不全,少数消失。无明显的再生修复;管壁增厚、管腔扩张、纤维组织增生。囊状扩张组较梭状扩张组病理损害明显。
3、囊状扩张与梭状扩张发病机制不同。梭状扩张发病与胆汁淀粉酶密切相关,囊状扩张与胆汁淀粉酶关系不大,可能是先天性胆管存在缺陷,再加上胆管远端狭窄所致。
4、胆总管囊肿内胆汁淀粉酶明显升高,管腔扩大,管壁上皮细胞凋亡明显,管壁软弱扩张形成囊肿。细胞凋亡在胆总管囊肿形成中起一定的促进作用。