【摘 要】
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藏红花是一种十分珍贵的中药材,但资源短缺,价格昂贵。药用植物内生真菌能够产生具有药用价值的代谢产物。本论文采用基因克隆技术从藏红花内生真菌3P1CQ1中克隆得到类胡萝卜素代谢途径合成酶基因,包括Cs Crt Y(番茄红素环化酶基因)、Cs ZCD(玉米黄素裂解酶基因)、Cs ALDH(醛脱氢酶)基因家族的Cs ALDH2/3/5,并对相关蛋白进行生物信息学分析,包括:开放阅读框分析、理化性质分析、
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藏红花是一种十分珍贵的中药材,但资源短缺,价格昂贵。药用植物内生真菌能够产生具有药用价值的代谢产物。本论文采用基因克隆技术从藏红花内生真菌3P1CQ1中克隆得到类胡萝卜素代谢途径合成酶基因,包括Cs Crt Y(番茄红素环化酶基因)、Cs ZCD(玉米黄素裂解酶基因)、Cs ALDH(醛脱氢酶)基因家族的Cs ALDH2/3/5,并对相关蛋白进行生物信息学分析,包括:开放阅读框分析、理化性质分析、跨膜结构域预测、二级和三级结构预测,为研究内生真菌产藏红花类胡萝卜素奠定了一定的基础。近年来,将异源基因转入大肠杆菌中来合成类胡萝卜素的报道被广泛关注。本文对含有藏红花类胡萝卜素合成基因的大肠杆菌重组子培养条件进行了优化。筛选了单因素温度、培养基、碳源、无机氮源和p H,在此基础上正交实验结果表明适合本实验菌株生长的最佳组合为:葡萄糖5 g/L,硝酸钠5 g/L,p H为5.5±0.05,接种量为15%。考察了正交优化结果的生长动态过程,在培养生长40 h对数生长后期诱导表达。经HPLC分析代谢产物,获得保留时间为22.8 min,25.7min,33.5 min和35.1 min的四种类胡萝卜素物质,较优化前的对照组分别提高20.9倍、38.4倍、2.7倍和23.1倍。
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