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目的:探究临床结直肠癌中DAB2IP与p53的相关性及DAB2IP的表达量与患者临床预后的关系。方法:通过公共数据库中的数据获得结直肠癌数据集的表达谱信息,分析DAB2IP表达量与p53信号通路的相关性。基因相关性分析用来分析DAB2IP与TP53及其下游基因表达量的相关性。通过DAB2IP、非特异性p53和突变型p53在结直肠癌组织芯片中的免疫组化染色情况,分析在p53野生型及突变型结直肠癌中,DAB2IP与p53蛋白水平的相关性。结合数据库临床随访数据,探究在p53野生型和突变型结直肠癌中,DAB2IP的表达量与结直肠癌患者临床预后的关联。结果:公共数据库结直肠癌数据集的表达谱数据分析结果显示,在结直肠癌中,DAB2IP的表达水平与p53信号通路呈正相关。Sugihara数据集的基因相关性分析结果显示,DAB2IP的表达水平与TP53下游基因的表达呈正相关,而与TP53的表达没有相关性,这种现象在TP53野生型结直肠癌中也同样能观察到。结直肠癌组织芯片的DAB2IP和p53免疫组化染色显示,在p53野生型结直肠癌样本中,DAB2IP和p53的蛋白水平呈正相关,而在p53突变型结直肠癌样本中,DAB2IP和p53在蛋白水平上没有明显相关性。患者生存分析显示,DAB2IP的表达水平仅与p53野生型结直肠癌患者临床预后呈正相关,与p53突变型结直肠癌患者临床预后没有明显相关性。结论:结直肠癌中DAB2IP的表达与野生型p53蛋白水平及p53信号通路呈正相关,且与p53野生型结直肠癌患者临床预后呈正相关。目的:探究临床结直肠癌中DAB2IP与p53的相关性及DAB2IP的表达量与患者临床预后的关系。方法:通过公共数据库中的数据获得结直肠癌数据集的表达谱信息,分析DAB2IP表达量与p53信号通路的相关性。基因相关性分析用来分析DAB2IP与TP53及其下游基因表达量的相关性。通过DAB2IP、非特异性p53和突变型p53在结直肠癌组织芯片中的免疫组化染色情况,分析在p53野生型及突变型结直肠癌中,DAB2IP与p53蛋白水平的相关性。结合数据库临床随访数据,探究在p53野生型和突变型结直肠癌中,DAB2IP的表达量与结直肠癌患者临床预后的关联。结果:公共数据库结直肠癌数据集的表达谱数据分析结果显示,在结直肠癌中,DAB2IP的表达水平与p53信号通路呈正相关。Sugihara数据集的基因相关性分析结果显示,DAB2IP的表达水平与TP53下游基因的表达呈正相关,而与TP53的表达没有相关性,这种现象在TP53野生型结直肠癌中也同样能观察到。结直肠癌组织芯片的DAB2IP和p53免疫组化染色显示,在p53野生型结直肠癌样本中,DAB2IP和p53的蛋白水平呈正相关,而在p53突变型结直肠癌样本中,DAB2IP和p53在蛋白水平上没有明显相关性。患者生存分析显示,DAB2IP的表达水平仅与p53野生型结直肠癌患者临床预后呈正相关,与p53突变型结直肠癌患者临床预后没有明显相关性。结论:结直肠癌中DAB2IP的表达与野生型p53蛋白水平及p53信号通路呈正相关,且与p53野生型结直肠癌患者临床预后呈正相关。目的:探究在结直肠癌细胞中,DAB2IP调控野生型p53的具体机制。方法:通过Western blot和q PCR检测干预DAB2IP后p53的蛋白水平和TP53m RNA水平的变化,大致确定DAB2IP对野生型p53调控是在转录层面还是转录后层面进行的。通过检测蛋白合成、降解速率明确DAB2IP是否参与了野生型p53的合成与降解过程。通过免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）,明确DAB2IP是否影响了p53的泛素化水平。在p53野生型结直肠癌细胞系中通过Co-IP的方法确定DAB2IP是否与野生型p53结合。在p53野生型结直肠癌细胞中,通过DAB2IP和p53的免疫沉淀和蛋白质谱检测,筛选可能介导DAB2IP调控野生型p53的与泛素化过程的蛋白并进行功能验证。通过定量Co-IP检测不同DAB2IP表达情况下,GRP75与p53的结合情况,明确DAB2IP如何通过GRP75调控p53。通过分别构建DAB2IP的N端和C端的截短质粒及结构域缺失质粒,使用Co-IP的方法确定DAB2IP的哪个结构域与GRP75结合,并使用相应的结构域缺失质粒进行功能验证。结果:在SW48细胞中敲减DAB2IP后,p53的蛋白水平显著降低,而TP53m RNA水平无变化。p53下游靶基因的m RNA水平明显降低。在SW48和HCT116细胞中,通过MG132抑制蛋白降解后发现,敲减DAB2IP使得p53蛋白合成速度在部分时间点升高;使用CHX抑制蛋白合成后发现,敲减DAB2IP使得p53降解速度明显增加。无论在正常还是应激状态下,SW48细胞中敲减DAB2IP都能使得p53的泛素化水平升高。相对应地,过表达DAB2IP明显抑制了p53的泛素化。Co-IP实验发现,在结直肠癌细胞中,野生型p53与DAB2IP不能结合。应用DAB2IP和p53的抗体进行免疫沉淀及蛋白质质谱分析,发现泛素连接酶相关蛋白GRP75最有可能参与了DAB2IP对野生型p53泛素化的调控。Co-IP实验验证了GRP75能分别与DAB2IP及p53结合。定量Co-IP显示在SW48细胞中敲减DAB2IP使得GRP75与p53的结合能力增强,对应地,在HEK293T细胞中过表达DAB2IP使得GRP75与p53的结合能力减弱。功能实验证实了GRP75能促进p53的泛素化降解,且介导了DAB2IP对野生型p53泛素化水平的调控。体外及体内实验均证实了GRP75能够逆转DAB2IP在p53野生型结肠癌细胞中的抑癌效应。Co-IP实验发现能与GRP75结合的是DAB2IP蛋白N端的Ras-GAP结构域。Ras-GAP缺失（△Ras-GAP）的DAB2IP的表达并没有降低p53的泛素化水平,也不能上调p53及其下游靶基因的蛋白水平。结论:DAB2IP通过其Ras-GAP结构域竞争性结合泛素连接酶相关蛋白GRP75,降低野生型p53的泛素化水平、维持其蛋白稳定性。