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2，4-二羟基-6-甲氧基-3，5-二甲基查耳酮(DMC)是桃金娘科植物水翁[Cleistocalyx operculatus(Roxb.)Merr.et Perry]花蕾中的一种天然化合物。前期研究发现，DMC能在细胞实验及裸鼠移植瘤实验中，下调多药耐药相关蛋白1(Multidrug resistance associated protein1，MRP1)的表达，增加BEL-7402/5-FU细胞内抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶的浓度，显著逆转肝癌多药耐药性。本论文对DMC逆转肝癌耐药的机制进行了初步探究。 首先探究了DMC对BEL-7402/5-FU细胞中药物外排相关因子的影响。结果表明DMC能浓度依赖地降低细胞内的GSH含量及GST活性，并使ADP/ATP比率增加。说明DMC能阻止药物-GSH共轭物形成，减少药物外排。 考察了DMC对BEL-7402/5-FU细胞中Nrf2/ARE的影响。EMSA结果表明DMC削弱了核转录因子Nrf2与抗氧化元件(antioxidant responsive element，ARE)的结合活性，10μM DMC作用2h使两者结合活性降低了36％;免疫荧光化学结果证明了DMC能抑制Nrf2核易位，减少Nrf2在细胞核中积累。用10μM DMC处理8h，BEL-7402/5-FU细胞中的Nrf2核质分布情况与敏感株相似。此外，Western blot结果还表明DMC下调了BEL-7402/5-FU细胞内Nrf2的表达，同时上调了Nrf2的负调节蛋白Keap1(Kelch-like ECH-associated protein1)的表达。结果阐明了DMC通过抑制Nrf2表达及核易位，削弱Nrf2与ARE的结合活性，从而抑制Nrf2/ARE。 论文进一步通过RNAi技术，验证DMC是否通过Nrf2/ARE，对BEL-7402/5-FU细胞中耐药相关蛋白（Ⅱ相解毒酶、MRP1等蛋白）产生影响。结果表明10μM DMC作用使细胞中谷氨酸半胱氨酸连接酶GCLC和GCLM的表达分别下调了85％和58％，并减弱MRP1在细胞膜上的定位。而通过RNAi技术敲减Nrf2表达后，DMC不再能对GCLC，GCLM与MRP1产生明显影响。证明了DMC确实是通过抑制Nrf2/ARE，下调GCLC和GCLM的表达使GSH合成减少，并减弱MRP1在细胞膜上的定位，从而抑制药物外排。 综上所述，DMC可能是通过抑制Nrf2/ARE信号通路，减少GSH合成及MRP1介导的药物外排，实现逆转肝癌耐药性，为其进一步开发应用提供了理论依据。