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DJ-XM属于天然产物,拥有丰富的营养价值,其药用价值也具有良好的开发应用前景。近年的研究表明DJ-XM除了有补肾功效,还有抗菌、抗氧化、提高免疫力等一系列药理活性。前期的研究中我们发现DJ-XM具有显著的助眠作用,但DJ-XM助眠活性部位筛选及其作用机制的研究国内外尚未见报道。本文采用经典的活性追踪法,依据戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠实验对DJ-XM的助眠活性部位进行筛选,并对其助眠机制进行初步探究。本文旨在全面深入的研究DJ-XM在助眠方面的潜在应用价值,为今后DJ-XM的开发与应用奠定基础。第一章综述随着现代社会压力的增加,社会环境的不断改变,睡眠障碍逐渐成为世界范围内的非常常见的精神疾病问题,成为诱发其它精神疾病的因素。本章综述了睡眠障碍、睡眠发生的机制,重点总结了助眠药物的药理学研究方法的进展。第二章DJ-XM的提取及活性部位的筛选本章采用70%乙醇按12:1（v:w）的液料比,90 oC回流2 h的方法,从DJ-XM中获得了DJ-XM提取物,再经不同极性溶剂萃取,得到具有助眠作用的DJ-XM正丁醇部位,进一步通过硅胶柱色谱法纯化,戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠实验筛选得到DJ-XM助眠活性部位DJ-XM-Fr3,经鉴定为黄酮部位。与空白组比较,DJ-XM-Fr3能够显著延长小鼠睡眠持续时间（6015.50±1135.95 vs 3610.17±1355.99 s,P<0.01）,缩短睡眠潜伏期（144.83±18.33 vs 178.83±11.96 s,P<0.01）。以戊巴比妥钠（阈下剂量）诱导小鼠睡眠发生率实验和PCPA致小鼠失眠模型评价DJ-XM-Fr3的助眠活性。结果表明:与空白组比较,DJ-XM-Fr3（50mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg）可使小鼠的入睡率分别增加至（33.33%,p>0.05;66.67%,p<0.01;66.67%,p<0.01）,且不呈剂量相关性;连续7 d给予DJ-XM-Fr3（100 mg/kg,0.4 mL/20g,i.g.）能够有效恢复PCPA（300 mg/kg）导致的失眠行为,与模型组比较,表现为延长小鼠的睡眠持续时间（P<0.01）,缩短睡眠潜伏期（P<0.05）。在此基础上,考察了DJ-XM-Fr3助眠作用的量效关系和时效关系。结果表明:DJ-XM-Fr3表现出了复杂的量效关系,有效剂量为150mg/kg、100 mg/kg,表现为延长小鼠的睡眠持续时间（p<0.01,p<0.01）,缩短睡眠潜伏期（p<0.05,p<0.05）。DJ-XM-Fr3起效天数为7 d、9 d,表现为延长了小鼠的睡眠持续时间（p<0.001,p<0.001）,缩短睡眠潜伏期（p<0.05,p<0.05）。根据对小鼠睡眠实验影响效果及个体之间的变异系数,最终确定给药剂量为100 mg/kg,给药天数为7 d。第三章DJ-XM-Fr3急性毒性研究针对本文筛选出来的DJ-XM助眠活性部位DJ-XM-Fr3,按照经口急性毒性试验毒性分类法的评价属于无毒物质,其LD50约为40005000 mg/kg。一次性给予DJ-XM-Fr3（2000 mg/kg,0.4 mL/20g,i.g.）后,观察14 d期间小鼠披毛光洁、行为正常、饮食正常、大便无稀溏,每只小鼠均未见其它异常表现,且无死亡现象;小鼠的体重和各脏器系数与空白组相比均无显著性差异（p>0.05,p>0.05）;病理学组织切片观察心、肝、脾、肺、肾、脑未见病理性改变。结果证明:DJ-XM助眠活性部位在应用时安全可靠,具有很好的研究和开发价值。第四章DJ-XM-Fr3助眠机制研究本章从GABA、5-HT、NO、Glu四种调节机制途径对DJ-XM-Fr3助眠作用机制进行了研究。通过ELISA试剂盒测定了连续7 d灌胃DJ-XM-Fr3（100 mg/kg,0.4 mL/20g,i.g.）后小鼠脑内GABA、5-HT、Glu的含量,与空白组比,GABA的含量提高了25.29%（p<0.05）;5-HT的含量降低了20.50%（p<0.05）;Glu的含量降低了21.16%（p<0.05）。与DJ-XM-Fr3组比较,连续7 d灌胃给予DJ-XM-Fr3（100 mg/kg,0.4 mL/20g,i.g.）后,联合Flumazenil（3.5 mg/kg,0.2 mL/20g,i.p.）可以明显阻断DJ-XM-Fr3的助眠作用,表现为延长小鼠的睡眠潜伏期（p<0.05）,缩短睡眠持续时间（p<0.05）;合并5-HT前体物质5-HTP（25 mg/kg,0.2 mL/20g,i.p.）,表现为缩短小鼠睡眠潜伏期（p<0.05）,延长睡眠时间（p<0.001）,二者具有协同作用;联合PCPA（300 mg/kg,0.2 mL/20g,s.c.）,表现为缩短小鼠的睡眠持续时间（p<0.05）,延长睡眠潜伏期,但无显著性差异（p>0.05）,二者表现出一定的拮抗作用;联合L-Arg（125 mg/kg,0.2 mL/20g,i.p.）表现为延长小鼠的睡眠持续时间（p<0.05）,缩短睡眠潜伏期（p<0.01）,二者表现出一定的协同作用;联合L-NAME（80 mg/kg,0.2 mL/20g,i.p.）表现为缩短小鼠的睡眠持续时间（p<0.05）,延长睡眠潜伏期（p<0.01）,二者表现出一定的拮抗作用。第五章DJ-XM-Fr3其它中枢药理活性研究本章采用戊四唑模型评价了DJ-XM-Fr3的抗惊厥效果。结果表明连续7 d灌胃给予DJ-XM-Fr3（200 mg/kg、250 mg/kg、300 mg/kg）后,与空白组比较,无显著延长小鼠的惊厥潜伏期（p>0.05,p>0.05,p>0.05）和死亡时间（p>0.05,p>0.05,p>0.05）,未显著缩短惊厥持续时间（p>0.05,p>0.05,p>0.05）。结果证明DJ-XM-Fr3无明显的抗惊厥活性。采用最常用的急性行为绝望模型通过体重监测结合小鼠悬尾实验（TST）和小鼠强迫游泳实验（FST）对DJ-XM-Fr3体外抗抑郁活性进行了研究。体重监测结果表明:DJ-XM-Fr3（150 mg/kg,0.4mL/20g,i.g.）可以明显改善抑郁小鼠的食欲,增加进食的同时保持了小鼠体重的增加;在TST中,DJ-XM-Fr3（150 mg/kg,0.4 mL/20g,i.g.）使小鼠悬尾不动时间缩短接近空白组水平,与模型组比较缩短了23.23%（p<0.05）;在FST中,DJ-XM-Fr3（150 mg/kg,0.4 mL/20g,i.g.）使小鼠强迫游泳不动时间缩短接近空白组水平,与模型组比较缩短了10.58%（p<0.05）。结果说明DJ-XM-Fr3可以增强小鼠的求生欲望,而使绝望时间明显缩短,从而具有抗抑郁活性。