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新城疫（Newcastle Disease，ND）是一种急性、高度接触性和致死性的禽类传染病，该病的发生给世界养禽业带来了巨大的损失，被国际兽疫局（Office International des Epizooties，OIE）列为A类疫病，其病原为新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）。近年来对新城疫病毒生物学特性的测定、新型疫苗的研究以及分子流行病学调查等一直是研究的热点。本文对NDV广西分离株GX7／02进行了生物学特性的测定和NDA疫苗的构建，动物免疫试验及体内分布的研究。参照国际上规定的新城疫病毒生物学特性判断的标准及方法，对新城疫广西分离野毒株GX7／02进行了生物学特性研究，结果显示，该毒株的鸡胚半数致死量（ELD50）为10-9.42／0.1mL，鸡胚半数感染量（EID50）为10-9.57／0.1mL，鸡胚最小致死量平均死亡时间（MDT）为54.0h，鸡胚成纤维细胞（CEF）组织培养半数感染量（TCID50）为10-9.50／0.1mL，脑内致病指数（ICPI）为1.925，6周龄鸡静脉内接种致病指数（IVPI）为2.43。表明该分离株具有与新城疫病毒速发型相类似的毒力，隶属于强毒株。用该分离株对16日龄的鸡、鸭、鹅分别进行人工感染试验，发病率分别为100％、40％和100％，死亡率分别为100％、0和60％。且试验证明GX7／02毒株属于血凝快速解脱型，血凝素热稳定性较差。设计两对特异性引物，采用RT-PCR技术扩增出新城疫广西分离株GX7／02的F和HN基因，将其分别克隆入真核表达载体pTracer-CMV2质粒中，置于PCMV启动子之下，构建成pTracer-CMV2F和pTracer-CMV2HN重组质粒。另设一对特异性引物，采用PCR技术从重组质粒pMD18-T-IL2中扩增出IL2基因，克隆入pTracer-CMV2F和pTracer-CMV2HN重组质粒中，置于PEF1启动子之下，构建成pTracer-CMV2FIL2和pTracer-CMV2HNIL2重组质粒。经酶切和序列测定正确后，采用脂质体法将重组质粒转染于BHK-21细胞。采用间接免疫荧光和RT-PCR方法检测到目的基因的表达。将pTracer-CMV2FIL2和pTracer-CMV2HNIL2以单独和联合（1：1）接种的方式分别免疫于两周龄的SPF鸡只，每只200ug。其中混合免疫的鸡只包括三个组，分别接种一次、两次和三次。接种后每周采血一次，ELISA方法检测抗体水平，并于接种后6周进行攻毒试验。试验结果显示，接种DNA疫苗的各组抗体水平明显高于对照组，差异极显著（P＜0.01）；pTracer-CMV2FIL2和pTracer-CMV2HNIL2分别单独免疫组抗体水平差异不显著（P＞0.05）；而联合免疫组的抗体水平均明显高于单独免疫组，差异显著（P＜0.05）；且抗体水平随着免疫次数的增多而升高，差异显著（P＜0.05）。攻毒试验显示联合免疫组的保护率均高于单独免疫组。为了研究接种以后DNA疫苗在体内的分布情况、表达时间、持续存在的时间以及在血液中的动态分布情况，将3周龄的三黄鸡肌肉接种200μg DNA疫苗pTracer-CMV2FIL2，巢式PCR法检测血清、心、脾脏、肺脏、法氏囊、脑、骨髓、胸腺和肌肉接种部位中pTracer-CMV2FIL2出现和存留的时间；荧光定量PCR法检测其在血液中的动态变化；RT-巢式PCR法检测其在上述部位的表达情况。试验结果表明，接种后2～3小时血清中可检测到pTracer-CMV2FIL2，6h时在血液中的含量最高，7d时已经检测不到；4h后在上述器官中可陆续检测到pTracer-CMV2FIL2的出现，13d后陆续消失；1d后可陆续检测到质粒所转录的mRNA，13d后陆续消失；接种后2h可在肌肉接种部位的细胞中检测到pTracer-OMV2FIL2的出现，10h可检测到mRNA，150d时仍然可以在肌肉接种部位的细胞中检测到质粒和mRNA存在。本研究为DNA疫苗的临床应用提供可靠的试验依据。参照国家兽医生物制品质量标准，分别用新城疫病毒广西分离株GX1／06（基因Ⅶ型）、传统疫苗株Lasota（基因Ⅸ型）以及国内参考强毒株F48E9（基因Ⅱ型）制备灭活油乳剂疫苗。免疫3周龄的SPF雏鸡，每周采血测定HI滴度，并于免疫接种4周后使用强毒株GX1／06进行攻毒试验。攻毒结果显示，三种油苗对免疫鸡只的保护率均为100％。