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背景:糖尿病创面常较难愈合,其原因之一是创面呈现持续的慢性炎症反应状态,而巨噬细胞表型和功能异常在其中扮演着重要角色。芦荟多糖(Aloe polysaccharideo,AP)不仅具有抗炎、促进创面愈合等作用,还能影响巨噬细胞的功能和细胞因子的分泌,其对创面愈合的积极影响可能与创面巨噬细胞不同极化状态的转变有关。目的:探讨AP对糖尿病创面的促愈合效果及创面组织巨噬细胞极化的影响。方法:1、建立糖尿病大鼠模型和分组:SPF级雄性SD大鼠30只,标准饲料适应性喂养3天,随机数表法选出7只大鼠为空白对照组(BLANK组),给予普通饲料喂养4周。剩余23只大鼠制备糖尿病模型:给予高脂高糖饲料喂养4周,并一次性腹腔注射1%的链脲佐菌素溶液30mg/kg,以空腹血糖≥16.7mmol/L并伴有明显的多饮、多食、多尿等症状作为成模标准。糖尿病大鼠随机分为芦荟多糖组(AP组)、对照组(b FGF组)和模型组(MODEL组),每组7只(剔除2只:1只空腹血糖<16.7mmol/L,另1只死亡)。2、皮肤创面制作和干预:使用电推剪剪短大鼠背部毛发并用脱毛膏脱毛。每只大鼠使用10%水合氯醛以3.0ml/kg的剂量腹腔注射麻醉,10.0mm皮肤打孔器在大鼠背部制备4个直径10.0mm深达肌层的创面,相距20.0mm。AP组和b FGF组每个创面分别涂抹10%芦荟多糖溶液(由芦荟多糖粉末和生理盐水按1:9质量比配制而成)0.1ml和碱性成纤维细胞生长因子0.1ml,MODEL组和BLANK组每个创面均涂抹0.1ml生理盐水。每天一次,连续14天。3、干预的第1、4、7、11、14天,每组使用随机数表法选出1只大鼠作为观察和取材对象(在最后一次取材后,每组实验大鼠均剩余2只,可预防实验过程中由于实验大鼠意外死亡带来的数据缺失)。观察大鼠一般情况和创面愈合情况,创面拍照并使用Image J图像分析软件描绘和标记创面面积并计算创面愈合率,使用10.0mm皮肤打孔器在原创面切取4个直径约10.0mm深达肌层的创面组织标本。酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测创面组织TNF-α和TGF-β1表达,HE染色观察创面组织病理学变化,免疫组织化学染色检测创面M1型和M2型巨噬细胞表面标记物CD86和CD206表达,Image J图像分析软件计算免疫组织化学染色阳性细胞数。4、统计学处理:血糖值、体重、细胞因子含量、免疫组织化学染色阳性细胞比率用±s表示。多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验,IBM SPSS Statistics 25.0软件和Graph Pad Prism 9.0软件进行数据处理分析和图表的绘制,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1、一般情况:各组大鼠在实验过程中生命体征平稳,AP组、b FGF组、MODEL组大鼠呈现糖尿病表现,空腹血糖较高,实验过程中体重下降较为明显;BLANK组生活习性未见明显改变,空腹血糖正常,实验中体重缓慢增长。2、创面愈合情况:各组大鼠创面在实验过程中未见明显感染,第4天AP组可见较为明显的肉芽组织增生,至第14天AP组创面大部分封闭,创面边缘新生表皮逐渐增厚,颜色与周围正常皮肤相似,而MODEL组创面呈现深红色,虽然创面边缘可见上皮化趋势,但未愈合面积仍较大。AP组创面愈合速度明显优于b FGF组和MODEL组,第14天AP组创面愈合率为(86.05±1.35)%,优于b FGF组的(75.37±2.37)%和MODEL组的(58.03±3.74)%(P<0.001)。3、创面TNF-α的表达:第1天,AP组、b FGF组、MODEL组创面TNF-α表达相同(P>0.05)。第1-7天,AP组、b FGF组、MODEL组创面TNF-α表达逐渐增加,但MODEL组增加幅度最大;第7-14天,AP组和b FGF组下降幅度较大,而MODEL组维持在较高水平。第14天,AP组TNF-α表达少于b FGF组(P<0.05)和MODEL组(P<0.001)。4、创面TGF-β1的表达:第1天,MODEL组、AP组、b FGF组创面之间TGF-β1表达相同(P>0.05)。随后AP组创面TGF-β1表达逐渐升高并一直保持较高水平,MODEL组创面TGF-β1升高但始终低于AP组(P<0.001)。第14天,AP组创面TGF-β1表达与b FGF组相同(P>0.05),但明显高于MODEL组和BLANK组(P<0.001)。5、组织学变化:第1天,AP组、b FGF组、MODEL组创面组织坏死肿胀和炎症较为明显,而BLANK组表现为急性渗出性炎症状态;第4-7天,AP组和b FGF组创面炎症略有减轻,开始出现肉芽组织和新微血管,而MODEL组创面仍可见大量坏死组织;第7-11天,AP组创面出现较多胶原纤维及成纤维细胞,并伴有含较多红细胞的新生微血管形成,b FGF组创面炎症减轻,可见少量新生微血管,MODEL组创面仍可见组织充血坏死及血管梗死;第14天,BLANK组创面已基本完成上皮化,AP组创面上皮化明显,可见大量胶原纤维生成,b FGF组炎症明显减轻,可见部分上皮化以及散在新生微血管及胶原纤维形成,MODEL组创面表明仍充斥大量红细胞,组织内炎性细胞略有增加,血管形成困难,组织坏死和空泡现象较为严重。6、CD86+细胞变化:MODEL组创面CD86+细胞早期较少,逐渐增多并于实验第7-14天保持较高水平,AP组、b FGF组、BLANK组创面CD86+细胞变化基本一致,均增加后下降。第14天,AP组创面CD86+细胞比率为(14.23±3.12)%,低于b FGF组的(20.12±2.71)%(P<0.05)和MODEL组的(31.53±3.19)%(P<0.001),但高于BLANK组的(6.35±0.91)%(P<0.05)。7、CD206+细胞变化:第1天,BLANK组、AP组、b FGF组和MODEL组创面均可见散在分布的CD206+细胞,其细胞比率基本一致(P>0.05)。此后,BLANK组创面先升后降,而AP组则逐渐升高。b FGF组和MODEL组缓慢增长,变化基本一致(P>0.05)。第14天,AP组创面CD206+细胞比率为(32.62±1.89)%,明显高于其余三组(P<0.001)。结论:1、AP能抑制糖尿病大鼠创面TNF-α的分泌,促进TGF-β1的分泌,减轻创面炎症反应并促进肉芽组织增生,具有明显的促愈合效果;2、AP可能通过促进创面巨噬细胞表型M1向M2转化促进糖尿病大鼠创面愈合作用。