【摘 要】
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目的检测SMAD4基因在胰腺癌AsPC-1和MIA PaCa-2细胞中的表达水平,并探究SMAD4基因与胰腺癌对于吉西他滨的耐药性的关系,试图解决临床上对于耐药性胰腺癌束手无策的境地,为胰腺癌的个体化医疗提供新的研究思路。方法1生物信息学分析SMAD4基因在胰腺癌细胞中的表达水平。2 CCK8法检测不同浓度吉西他滨对胰腺癌细胞的毒性作用,进而选取最佳作用浓度。3台盼蓝排斥实验检测吉西他滨在不同时间
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目的检测SMAD4基因在胰腺癌AsPC-1和MIA PaCa-2细胞中的表达水平,并探究SMAD4基因与胰腺癌对于吉西他滨的耐药性的关系,试图解决临床上对于耐药性胰腺癌束手无策的境地,为胰腺癌的个体化医疗提供新的研究思路。方法1生物信息学分析SMAD4基因在胰腺癌细胞中的表达水平。2 CCK8法检测不同浓度吉西他滨对胰腺癌细胞的毒性作用,进而选取最佳作用浓度。3台盼蓝排斥实验检测吉西他滨在不同时间作用下对胰腺癌细胞存活率的影响,进而选取最佳作用时间。4实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测SMAD4基因的m RNA和蛋白水平的表达。5通过划痕实验和Transwell实验检测沉默或过表达SMAD4基因在药物的共同作用下对细胞迁移、侵袭能力的影响。结果1 cBio Portal数据库分析有33%胰腺癌患者发生SMAD4基因突变,且突变多为缺失、错义突变和截断突变;高通量测序分析SMAD4基因在MIA PaCa-2细胞的表达量明显高于AsPC-1细胞,且差异倍数在两倍以上;同时,AsPC-1细胞中SMAD4基因的m RNA和蛋白的表达水平也明显低于MIA PaCa-2细胞。2吉西他滨作用于AsPC-1细胞的最佳浓度为10-5 M、最佳作用时间是48 h,吉西他滨作用MIA PaCa-2细胞的最佳浓度为10-7 M、最佳作用时间是48 h。3与对照组相比,沉默SMAD4基因后吉西他滨作用MIA PaCa-2细胞的存活率明显上升;与PBS组相比,加药组细胞迁移和侵袭的细胞数明显降低,但转染组相较于无转染组的迁移侵袭的细胞数明显上调。4过表达SMAD4基因后,吉西他滨作用于转染组细胞的存活率明显低于对照组,且转染质粒加药组的细胞划痕面积减少最慢,通过小室的侵袭细胞数明显减少。结论1 SMAD4基因在AsPC-1细胞和MIA PaCa-2细胞中存在明显差异。2SMAD4基因缺失与胰腺癌细胞对GEM耐药性相关。3 SMAD4基因作为一种抑癌基因,能增强GEM抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力,从而为解决胰腺癌的耐药性提供新方法。图12幅;表8个;参112篇。
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