局部亚低温对缺血神经元保护机制的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ni_gejianren
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卒中是人类的常见病,目前研究认为缺血性脑损伤是一系列复杂的级联反应,其中包括谷氨酸受体的激活、细胞内钙超载和高能磷酸化合物耗竭.近几年来亚低温治疗对缺血性脑损伤的保护作用已经得到了世界公认,但其作用机制仍不慎明了.对于亚低温脑保护机制的深入探讨将有助于临床上研究开发更为有效的低温治疗方法.该实验利用wistar大鼠大脑中动脉闭塞的动物模型,采用免疫印记法和生物化学方法,研究了大鼠脑缺血后病灶测皮质、治理马CA1区和丘脑等部位calcineurin(CaN)的活性和含量.该实验应用急性分离乳鼠的海马组织,建立了可靠的海马神经元原代培养方法,海马神经元生长状态良好,可以满足对细胞状态要求较高的研究需要.本实验应用了目前较为先进的研究手段-激光共焦扫描显微镜技术,研究了20μmoI/L的NMDA持续损伤海马神经元10min、3h、6h和24h时海马神经元胞体内游离钙离子的浓度.该实验还应用了较为先进的电生理手段-膜片钳技术,研究了35℃亚低温对20μmoI/L的NMDA损伤5分钟后海马神经元电压依赖性Na<+>通道和K<+>通道的影响.结果显示,35℃亚低温对电压依赖性Na<+>和K<+>通道无影响,电压依赖性钠离子和钾离子通道并非亚低温的作用位点.本研究从脑梗死动物模型和兴奋毒性损伤的海马神经元细胞模型两个层次入手,利用了包括激光共焦扫描显微镜技术和膜片钳技术在内的多种较为先进的研究手段,首次分析了大鼠永久性大脑中动脉闭塞后不同脑区CaN活性和含量的变化,探讨了低温对治疗对CaN的影响;首次研究了亚低温处理对NMDA损伤后原代培养的大鼠海马神经元线粒体膜电位的影响;首次研究也亚低温处理对NMDA操作后大鼠海马神经元的电压依赖性离子和钾离子通道的影响,证明了抑制CaN活性、抑制细胞内钙超载、稳定线粒体膜电位是亚低温脑保护的作用机制.
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