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目的:观察不同剂量参附注射液对LPS(lipopolysaccharide,脂多糖)诱导脓毒症小鼠心肌线粒体损害的影响,并试图探求参附注射液影响脓毒症相关心肌功能损害的作用机制。既为脓毒症临床诊治提供理论依据,也为参附注射液临床应用提供基础研究。方法:1.取50只C57/B6J小鼠随机分为正常对照组(Normal Control,NC)、假脓毒症组(Sham组)和脓毒症组(LPS组,3mg/kg、8mg/kg、12mg/kg),比较小鼠一般情况以及生存情况,选择最佳模型剂量和取材时间点。2.另取61只C57/B6J小鼠随机分为正常对照组(NC)、假脓毒症组(Sham)、脓毒症组(LPS)、参附注射液低剂量组(LPS+SFI-Low)(ShenFu Injection,SFI,浓度3.0ml/kg)、参附注射液高剂量组(LPS+SFI-High)(SFI浓度10.0ml/kg)5组,检测和比较以下指标:(1)小鼠一般脓毒症表现。(2)ELISA法检测各组小鼠血清心肌损伤生化指标(CK-MB、NT-pro-BNP、CTnI)(3)各组小鼠心肌病理损伤:苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌细胞形态、炎症因子浸润水平。脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察各组小鼠心肌细胞凋亡情况,比较凋亡率。(4)各组小鼠心肌超微结构损伤:透射电镜观察小鼠心肌线粒体立体形态学(线粒体平均面积和体密度),判断线粒体肿胀程度,以及线粒体肿胀程度与心肌损伤指标之间的相关性。(5)蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)测定各组小鼠心肌凋亡相关蛋白Bcl-2、Bid、tBid、Caspase-9 含量,计算 Bcl-2/Bid。结果:1.LPS-1、LPS-2、LPS-3组小鼠建模后开始死亡时间分别是15h、12h、8h,LPS-2组小鼠48h存活率高于LPS-3组,小鼠脓毒症表现明显,死亡率与人类脓毒症死亡率接近,故选择LPS-2为本研究实验模型(LPS腹腔注射剂量为8mg/kg),建模后6h、12h、24h为取材时间点。2.LPS+SFI-High干预组小鼠48h存活率高于LPS组以及LPS+SFI-Low。3.LPS组小鼠建模后6小时出现脓毒症表现且逐渐加重,12小时脓毒症表现最明显;LPS+SFI-High组脓毒症表现较LPS组明显减轻,但LPS+SFI-Low组与LPS组相比较无明显差异。4.LPS组可见HE染色心肌细胞形态异常、肌丝紊乱、间质水肿、CK-MB、NT-proBNP、CTnI水平升高。LPS+SFI-High干预组心肌结构基本完整,心肌纤维断裂少,间质水肿明显好转,炎性细胞浸润明显改善,病理损害明显减轻。CK-MB、NT-proBNP、cTnI水平下降,而LPS+SFI-Low组与LPS组比较无明显差异。TUNEL检测心肌细胞凋亡显示,与正常对照组相比,Sham组心肌组织凋亡无明显变化,LPS组、SFI组小鼠心肌细胞TUNEL平均光密度均高于Sham组,且LPS+SFI-High组细胞凋亡率较LPS组及LPS+SFI-Low组明显降低。5.透射电镜的结果显示,对照组心肌肌丝整齐、清晰、规则排列,条带清晰,肌节存在,线粒体分布位置正常,在肌丝之间,数量丰富,大小基本一致,呈圆形或椭圆形,线粒体外膜的嵴排列密集,平行排列,基质颗粒多而致密。Sham组与对照组相比无明显差异,LPS组小鼠心肌肌丝紊乱,线粒体肿胀明显,部分出现“空泡样变”、边界不清晰、基质密度降低、不均匀等。造模后12小时LPS模型组小鼠线粒体改变最严重,经过参附注射液处理小鼠心肌超微结构有明显改善情况,空泡样变明显减少,线粒体肿胀有所缓解,尤其是LPS+SFI-High组小鼠线粒体改善较LPS+SFI-Low组更明显。6.Western-blot显示:与对照组比较,LPS处理后小鼠心肌Bcl-2表达明显抑制(P<0.0001),Bid、tBid、Caspase-9 表达上调明显(P<0.0001);SFI 处理后小鼠心肌Bcl-2蛋白的表达较LPS组显著提高,尤其是LPS+SFI-High组与LPS组相较差异具有统计学意义(P<0.05),同时SFI组Bid、tBid、Caspase-9蛋白的表达较LPS组降低,LPS+SFI-High组与LPS组相比较Bid、tBid、Caspase-9差异有统计学意义(P<0.05)。7.血清CK-MB、CTnI水平与线粒体肿胀程度呈正相关,且CTnI较CK-MB对线粒体的肿胀和损伤程度具有更高的敏感性。结论:1.脓毒症可造成心肌线粒体超微结构损伤。2.高剂量参附注射液可对脓毒症时心肌线粒体损伤起保护作用。3.SFI可通过上调Bcl-2水平、下调Bid、tBid以及Caspase-9水平,抑制脓毒症诱导的线粒体途径心肌细胞的凋亡,从而保护心肌功能。