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A型流感病毒M2蛋白(A/M2)在病毒囊膜上以四聚体形式存在,分子间二硫键将四个M2分子围成一个质子通道,该通道介导的酸化是诱发HA变构及病毒vRNP释放的前提条件。A/M2相对最长的胞内段和其在被感染细胞的质膜上大量存在的现象暗示A/M2的功能可能不仅仅局限于离子通道活性,而具有更多的生物学功能。为此,本实验用重组真核表达质粒pCAGGS-CFlag-A/M2转染HEK-293T细胞,用偶联有抗Flag抗体的琼脂糖球珠免疫沉淀A/M2-Flag融合蛋白同时共沉淀与A/M2相互作用的蛋白。借助SDS-PAGE分离及质谱分析技术,筛选到细胞内与A/M2存在相互作用的两类蛋白ataixn10和eIFs。两种蛋白的发现为流感病毒感染引发小脑性共济失调以及病毒蛋白合成调控方面提供了理论依据。
NP(nucleoprotein)是支撑病毒基因组的脚手架蛋白,参与病毒RNA的转录、复制、细胞内转运及病毒的包装等过程。NP蛋白高度保守,是流感病毒分型的重要依据,是流感病毒分型诊断的基础。基于NP蛋白的ELISA检测是目前最常用的流感病毒分型诊断方法,但NP蛋白的表达纯化较难。将A/WSN/33病毒株NP基因全长插入原核表达载体pET28a,在E coli rosetta2菌株中获得高表达的可溶性蛋白,经Ni-NTA亲和层析以及分子筛层析两步纯化获得95%以上的高纯度蛋白,为NP抗原的规模化生产奠定了技术基础。另外,还表达纯化了NP的多种突变体,试图研究NP可能存在的RNA脱帽酶活性。但并没有得到预期结果。对表达的蛋白也进行了晶体筛选,但到目前为止,还未获得可衍射的晶体。