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K亚群禽白血病是由K亚群禽白血病病毒（Subgroup K Avian Leukosis Virus,ALV-K）引起的一种禽类肿瘤病。ALV-K是一种新的病毒亚群,2012年首次发现于我国本地鸡群。随后,在我国南方多个地方品种鸡群中分离发现该病毒。该病毒感染后,可损伤免疫系统,引起严重免疫抑制,并能诱导产生神经胶质瘤。然而,目前ALV-K侵入宿主细胞机制以及侵入后引起的致病机制尚不清楚。病毒囊膜蛋白上的受体结合域与细胞受体相互作用是介导禽白血病病毒感染的首要步骤。为阐明ALV-K的侵入机制,本研究鉴定了ALV-K的细胞受体和gp85上的受体结合域。为鉴定ALV-K的细胞受体,本研究首先将ALV-K gp85与其他常见外源性ALV gp85蛋白进行氨基酸序列同源性分析,发现ALV-K gp85与ALV-A同源性最高,为80.8%。然后进行了交叉干扰实验,结果表明A亚群ALV（ALV-A）gp85蛋白能够抑制ALV-K的感染,同样ALV-K gp85蛋白也能抑制ALV-A的感染,存在交叉干扰现象,因而推测ALV-K可能利用ALV-A的细胞受体Tva进入细胞。为验证这一假说,本研究利用Co-IP和Pull-down实验检测了ALV-K gp85与Tva的互作,结果表明,ALV-K gp85蛋白能与可溶性的Tva（soluble Tva,sTva）相互作用。受体结合实验结果表明ALV-K gp85能高效结合跨膜表达的Tva,结合率在90%以上。受体阻断实验结果表明,sTva浓度从1.6μg/mL开始可显著阻断病毒进入。受体重建实验结果表明RCAS-K-GFP能够进入表达Tva的非易感细胞（293T）并复制产生较强的GFP荧光。以上结果充分表明Tva是ALV-K的细胞受体,能够介导ALV-K进入宿主细胞,启动感染。有文献报道ALV-A、B、C和E亚群的gp85与细胞受体的相互作用主要发生在宿主决定区hr1（host range region1,hr1）和hr2。为进一步鉴定ALV-K的受体结合域,本研究采用HA标签逐段替换策略,将hr1（T120～E160）分别按照从前往后顺序依次进行5次替换,hr2（Q194～K240）进行3次替换,共构建了8组可溶性表达质粒。将野生型gp85及HA替换的gp85蛋白进行圆二色谱测定,结果表明HA2和HA6～8替换的gp85蛋白二级结构与野生型gp85差异较大。受体结合实验结果表明,HA2和HA6～8替换的gp85蛋白均丧失了与Tva结合的能力,结合率低于30%。病毒阻断实验结果类似于受体结合试验,HA2和HA6～8替换的gp85蛋白均不能有效封闭DF-1细胞表面受体进而阻断病毒进入。以上结果证明,位于ALV-K gp85中间1/3区域的hr1中的HA2（C129～I137）和hr2对应的HA6～8（Q194～K240）区域的氨基酸构成gp85上的受体结合域。为进一步鉴定ALV-K gp85蛋白结合受体的关键氨基酸,比较了上述受体结合域内不同亚群ALV毒株gp85相应氨基酸序列,根据亚群间不同、亚群内保守的原则,确定了8组潜在关键氨基酸位点。为验证这些位点在受体结合中的作用,在gp85-HA2和HA6～8蛋白基础上回复突变上述氨基酸,构建了8组gp85-HA回复突变体质粒。受体结合实验结果表明,gp85-HA6R198、gp85-HA6R200C201G202与Tva相对结合能力分别可以达到60%和75%。这些结果表明ALV-K gp85的R198和R200C201G202位氨基酸在结合受体中发挥关键作用。本研究鉴定了ALV-K的细胞受体及gp85受体结合域,并鉴定出决定ALV-K结合Tva受体的关键氨基酸。这些研究结果为阐明ALV-K侵入宿主细胞机制及抗病毒靶点筛选奠定了基础。