目的:近年来，随着新药开发步伐的加快，如何快速有效地从众多中草药化合物中寻找到具有潜在药理活性的单体成为亟待解决的问题。基于靶标蛋白的化合物筛选平台能够为解决以上问题提供一个有力的帮助。蛋白酶体广泛存在于真核细胞中，参与细胞各类生理功能的调节，与神经退行性疾病和癌症等众多疾病密切相关，是一个重要的治疗靶点。为更快的寻找中草药中作用于蛋白酶体的化合物，本课题利用基因重组技术，对人源蛋白酶体催化亚基β1、β2、β5进行重组表达。以这三个重组亚基为基础，构建一个中草药化合物的筛选平台。　　 方法:将人源蛋白酶体催化亚基β1(PSMB6)、β2(PSMB7)、β5(PSMB5)的cDNA编码序列，分别与原核表达载体pET28a(+)连接，重组质粒鉴定正确后转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株，转化后以1mmol/L浓度的IPTG诱导，最后利用重组蛋白所带的His-tag标签，以固相金属亲和色谱(immobilized metal affinitychromatography，IMAC)方法纯化。对于溶解性太低的β5亚基，重新将cDNA编码序列连接上促溶表达载体pMAL-c5X或pET32b(+)，分别转化入BL21(DE3)菌株，以1 mmol/L浓度的IPTG诱导，分别以重组蛋白所带的MBP标签和His-Tag标签亲和纯化。　　 结果:得到5.52mg高纯度的β1(PSMB6)重组蛋白，2.04mg的β2(PSMB7)重组蛋白。β5(PSMB5)上清纯化后无目的蛋白富集。对纯化所得到的PSMB6和PSMB7两个重组蛋白进行质谱鉴定，将二者的氨基酸序列与它们对应的天然蛋白氨基酸序列比较，重组蛋白氨基酸序列与天然蛋白氨基酸序列吻合，覆盖率分别为83.75％和67.79％。PSMB5的促溶表达获得MBP-PSMB5和Trx-PSMB5两种可溶性融合蛋白，其中MBP-PSMB5的纯化结果不能满足纯度要求，而Trx-PSMB5的表达可成功获得高纯度的融合蛋白，为后续研究提供基础。　　 结论:本研究成功构建了一个作用于蛋白酶体活性亚基的中草药化合物的筛选平台，为快速高效发现新的中草药活性化合物提供了工具。本研究对更好地开发生药资源，阐明中草药作用靶点和机制，使传统药物实现现代化、国际化具有一定的实用意义。