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第一部分：高效液相法分析内源性15-HETE 目的：建立反相高效液相色谱分析内源性15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)的方法，对肺动脉高压研究中细胞水平、肺组织水平的15-HETE进行含量检测，最终为缺氧性肺动脉高压的机制研究提供理论依据。 方法：饲养正常和缺氧组的大鼠，培养正常和缺氧条件下的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)。从生物组织和细胞中提取15-HETE，采用安捷伦1200色谱系统对15-HETE进行分析，色谱条件为：Agilent对称反相ODS-C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)，流动相是水相(0.1％HAc-H20)：甲醇=20:80，安捷伦荧光检测器，激发波长Ex=260nm，发射波长Em=398nm，柱温=30℃。用Agilent6310离子阱质谱分析仪对衍生的15-HETE进行结构确证。 结果：高效液相色谱法分析大鼠肺组织中内源性15-HETE的水平，方法可靠，花生四烯酸代谢产物彼此分离效果较好，结果显示缺氧条件下大鼠肺组织中15-HETE的生成量显著高于正常水平，肺动脉平滑肌细胞中显示的结果与组织是一致的，加入15-L0抑制剂NDGA后，15-HETE含量随即减少。 结论：1：高效液相色谱法可以检测肺组织和肺动脉平滑肌细胞中15-HETE的含量，本方法灵敏度高，简单快速，重复性良好，适用于细胞、组织、体液、血清、尿液中15-HETE的含量检测，为研究生物组织样品中花生四烯酸类物质的代谢状况提供了分析基础。2：缺氧诱导15-L0表达，15-HETE生产量增加，进而诱导缺氧性肺动脉高压的产生。 第二部分：15-HETE对PASMCs中ROS生成的影响 目的：活性氧(ROS)是血管损伤因子，参与肺动脉高压的血管损伤，本研究旨在观察15-HETE对ROS生成水平的影响。用ROS试剂盒检测15-HETE对肺动脉平滑肌细胞中的ROS生成情况作用。血管中NOX4是ROS的主要来源，采用Western Blot方法分析该细胞NOX4蛋白表达情况，最终为缺氧性肺动脉高压的机制研究提供理论依据。 方法：培养肺动脉平滑肌细胞，采用Western Blot方法分析15-HETE对肺动脉平滑肌细胞NOX4蛋白表达的作用；选择形态良好的细胞，用碧云天活性氧试剂盒检测15-HETE对肺动脉平滑肌细胞ROS生成量的作用。 结果：用ROS试剂盒检测结果显示，15-HETE促进PASMCs中ROS的生成，Western Blot分析结果显示15-HETE促进PASMCs中NOX4的蛋白表达。 结论：15-HETE能够促进PASMCs的NOX4蛋白表达，进而促进ROS的生成，5-L0/15-HETE可能通过ROS途径诱导肺动脉高压。