10种植物精油生物活性及其化学成分研究

来源 :贵州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangmingjie
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目的:研究10种植物精油的抑菌活性及其对黑腹果蝇(Drosophila melanogaster Meigen)行为的影响,分析这些植物精油的化学成分,以期能发现活性较好的植物精油及其活性化合物,为进一步研究其作用机制和应用于生产实践奠定理论基础。方法:(1)采用水蒸气蒸馏法提取青蒿(Artemisia caruifolia)、艾蒿(Artemisia argyi)、地椒(Thymus quinquecostatus)、花椒(Zanthoxylum bungeanum)、鱼腥草(Houttuynia cordata)、干辣椒(Capsicum annuum)、小香葱(Allium cepiforme)、番茄(Lycopersicon esculentum)、万寿菊(Tagetes erecta)、蒲公英(Taraxacum mongolicum)10种植物精油。(2)采用笼罩法测定10种植物精油对黑腹果蝇行为影响。(3)采用96孔板微量稀释法和抑制菌丝生长速率法测定10种植物精油对5种供试细菌的和5种植物病原真菌的抑菌活性。(4)通过气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析了10种植物精油的化学成分。(5)采用正相硅胶柱色谱法、薄层色谱法及半制备HPLC法等技术分离了地椒精油的单体化合物,采用NMR、MS等波谱技术解析单体化合物结构,并测试了单体化合物的抑菌活性。(6)测试了地椒精油中抑菌活性化合物香芹酚对金黄葡萄球菌超微结构和一些生理指标的影响。结果:(1)青蒿精油对黑腹果蝇的驱避活性最好,浓度为500 mg/L时驱避率为88.48%;其次为花椒和艾蒿,浓度为500 mg/L时驱避率分别为73.33%、68.58%。(2)地椒精油抑制细菌的活性最好,对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的最小抑菌浓度(MIC)为31.25 mg/L,对绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)的MIC为62.5 mg/L,对大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、青枯菌(Ralstonia solanacearum)的MIC均是250 mg/L;鱼腥草、万寿菊、蒲公英、花椒、辣椒精油对5种供试菌的活性比地椒精油要弱;香葱、番茄叶、青蒿、艾蒿精油的抑菌活性就更弱。抑制真菌实验的结果与抑制细菌的结果相似,地椒精油对人参锈腐菌(Cylindrocarpon destructans)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、根腐菌(Phytophthora cinnamomi)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、苍术黑斑病菌(Alternaria tenuissima)这5种植物病原真菌抑制作用最强,IC50分别为224.11mg/L、226.66 mg/L、223.55 mg/L、144.58 mg/L、107.09 mg/L,其次活性较好的是花椒精油,其对人参锈腐菌的IC50为253.07 mg/L,对其余4种真菌的IC50均大于400 mg/L;另外8种植物精油抑制真菌活性较差。(3)GC-MS分析10种精油化学成分的结果为:青蒿、艾蒿、花椒、万寿菊、番茄、蒲公英、鱼腥草、辣椒、小香葱、地椒精油中含量较高的化合物分别是石竹烯氧化物、萘嵌戊烷、芳樟醇-L、胡椒酮、薄荷脑、丁子香酚、2-十一烷酮、反式茴香脑、4-乙烯基-2-甲氧基苯酚、百里香酚。(4)苯乙醇对黑腹果蝇的驱避活性最好,当浓度为1000 mg/L时,驱避率为89.87%,其余化合物的驱避活性均较差。丁子香酚、α-萜品醇、萘嵌戊烷均表现出“高抑低促”的现象。(5)从地椒精油中共分离得到了9个化合物,其结构分别为肉豆蔻酸(1)、十六烷酸(2)、芥酸酰胺(3)、丁子香酚(4)、松油烯-4-醇(5)、百里香酚(6)、香芹酚(7)、3-辛醇(8)、苯甲醛(9)。测试分离得到的9个单体化合物的抑菌活性结果表明:百里香酚、香芹酚、丁子香酚和芥酸酰胺对5种供试细菌均有抑菌活性,其中香芹酚的抑菌活性最强,对青枯菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的MIC值分别为125 mg/L、62.5 mg/L、250 mg/L、125 mg/L、250 mg/L。另外5个化合物抑菌活性较差。(6)测试了香芹酚作用后金黄色葡萄球菌的生长曲线。透射电镜(TEM)照片显示香芹酚对金黄色葡萄球菌超微结构的影响如下:药物作用下,可观察到不对称分裂的细菌,且分裂界面上出现了不正常的凸起,随着药物作用时间的延长,可见细菌细胞壁变的毛躁,继而出现了明显的质壁分离现象,细胞壁进一步皱缩,但细胞膜未见明显异常,最后可见细菌畸形并消解。生理指标测试结果显示:药物作用后菌悬液的电导率升高,可溶性总糖的含量下降、磷代谢利用率下降。推测香芹酚破坏了细菌的外层结构,导致膜通透性发生改变,影响了细菌的正常生理代谢,从而起到抗菌抑菌效果。结论:本课题所研究的10种植物精油及其主要化合物均具有一定的生物活性,该研究内容为开发植物精油的应用价值提供了理论依据。
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