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木聚糖是地球上含量第二丰富的多聚糖类,存在许多植物体内,其结构相对复杂,主链是β-1,4糖苷键相连的D-吡喃木糖,侧链基团包括阿拉伯糖,阿魏酸酯基,葡萄糖醛酸,乙酰基等。因此,木聚糖酶的降解需要其它酶的共同完成。木聚糖酶主要将木聚糖的主链切割生成木寡糖或木糖,而阿拉伯呋喃糖苷酶作为辅助酶切割木聚糖酶侧链,二者共同作用充分降解木聚糖,降低生产成本,提高生产效率。 本研究基于对嗜热真菌Thermoascus aurantiacus JCM12803和Talaromyces leycettanus JCM12802全基因组序列的分析,挖掘出一个新颖的木聚糖酶基因Tcxyn10a和一个阿拉伯呋喃糖苷酶基因Abf51a,并在毕赤酵母中(Pichia pastoris GS115)成功表达,对成熟蛋白进行了功能验证以及二者协同作用的探索。主要结论如下: 1.重组木聚糖酶TcXyn10a以榉木木聚糖为底物,最适反应温度为65-70℃,在60℃条件下保持酶活力稳定,最适反应pH为5.0,在pH3.0-11.0条件下保持稳定,属于高温酸性酶。其动力学常数Vmax为2.6±0.19mg/mL,Km值为2.6±0.19mg/mL。该酶对大多数金属离子有抗性,Cu2+和SDS除外。TcXyn10a具有宽泛的底物特异性,包括小麦阿拉伯木聚糖(2055±28U/mg)、地衣多糖(10.9±0.4U/mg)及CMC(7.4±0.2U/mg)等。对TcXyn10a降解产物进一步分析可以看出,当以小麦阿拉伯木聚糖为底物,水解产物主要是单糖和木二糖,进一步说明TcXyn10a具有将聚糖降解为寡糖的能力。 2.重组阿拉伯呋喃糖苷酶Abf51a的最适反应温度为55℃,在40-60℃下都能保持相对高的酶活力,最适反应pH为3.5,在pH2.5-6.0之间剩余45%以上的酶活力,为典型的中温嗜酸酶。该酶的Vmax为3333.3mmol/min/mg,Km值为3.0±0.2mg/mL且对SDS外的其他金属离子和化学试剂有抗性。 3.以小麦阿拉伯呋喃糖苷酶为底物时,重组木聚糖酶TcXyn10a和重组阿拉伯呋喃糖苷酶Abf51a协同作用比较明显,可以大大提高还原糖量的生成量。 本研究不但丰富了木聚糖酶及阿拉伯呋喃糖苷酶的基因资源,为工业领域上提供了两种具有潜在应用价值的候选酶。