论文部分内容阅读
目的本研究将探讨,丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone ⅡA sulfonate,STS)是否可以靶向恢复慢性低氧肺动脉高压(chronic hypoxic pulmonary hypertension,CHPH)模型中骨形成蛋白Ⅱ型受体(bone morphogenetic protein receptor typeⅡ,BMPR2)的表达,及是否会通过影响BMPR2信号通路逆转肺动脉高压,在此基础上明确STS调控BMPR2的分子机制。方法1.建立CHPH大鼠模型,观察STS治疗后较对照组的相关指标的变化,(1)观察右心室收缩压,右心肥厚指数,心输出量及利用肺组织HE染色观察肺动脉病理改变情况,明确模型建立是否成功及STS对肺动脉高压模型的治疗作用;(2)通过提取大鼠肺组织蛋白,利用蛋白免疫印迹(western blot,WB)法检测BMPR2及其相关调控蛋白小窝蛋白1(caveolin 1,CAV1)的表达变化,并检测其下游信号p-smad1/5/8的激活;(3)通过荧光标记凋亡相关蛋白剪切型-半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3),观察大鼠肺动脉内皮细胞凋亡情况;2.培养原代肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)(1)利用WB法和实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,RT-PCR)实验方法检测STS处理组较对照组中BMPR2总蛋白及m RNA的变化;(2)利用放线菌酮(cycloheximide,chx)处理PMVEC不同时间段后,应用WB法检测BMPR2蛋白表达变化;(3)膜蛋白分离实验:利用WB法检测胞膜组分中BMPR2及CAV1的表达变化;(4)利用重组蛋白骨形成蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)处理PMVEC,应用WB法检测BMPR2下游信号p-smad1/5/8蛋白的激活。结果1.首先,各项肺动脉高压病理生理学指征均显示CHPH模型建立成功;其次,STS模型治疗组与模型对照组相比,右心室收缩压,右心肥厚指数,心输出量及肺血管重塑均明显改善,同时STS可显著抑制CHPH模型大鼠内皮细胞的凋亡。2.在CHPH模型大鼠中,STS可显著恢复组织中BMPR2和CAV1的蛋白表达,同时也观察到p-smad1/5/8得到显著激活。3.STS对PMVEC中BMPR2与CAV1的m RNA表达,及其相应的总蛋白的表达无明显影响。4.在大鼠PMVEC中,与对照组相比,STS刺激可明显增加BMPR2蛋白的稳定性,抑制其经由溶酶体途径的蛋白降解。5.在大鼠PMVEC中,与对照组相比,STS刺激可显著增加BMPR2和CAV1蛋白在膜蛋白组分中的定位。6.在大鼠PMVEC中,与对照组相比,STS刺激可显著加强BMP9对BMPR2下游信号分子p-smad1/5/8的激活。结论以上结果表明,在慢性低氧肺动脉高压模型大鼠中,STS可以靶向抑制肺动脉内皮细胞的过度凋亡。而STS对内皮细胞的保护可能通过其对BMPR2蛋白及其信号通路的调控作用。在分子水平,STS可通过抑制BMPR2蛋白降解增加其蛋白的稳定性,增加其在胞膜的定位,进而增加其蛋白的功能,促进BMPR2信号通路的转导。