农业害虫种类多且危害广、危害周期长,目前仍以化学防治为主,但长期的化学农药使用,带来了“3R”问题,造成了生态环境的破坏。生物农药由于其对人畜、坏境无危害,越来越被大家所接受。苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)其可产生特异性杀虫蛋白,对多种农业害虫具有特异的杀虫活性。本研究从北京植物园和廊坊实验基地共采集样品118种(植物园109种,基地9种),包含41个目,59个科,从中选取42个科(1512个样品),通过植物叶片,来进行Bt菌株的分离。分离得到64株含有杀虫晶体的菌株,分离率为4.23%;42个科中共有25个科分离出Bt,分离率为59.5%。其中七叶树科分离得到6株Bt菌株,其次是禾本科和茄科各分离出5株,鼠李科、松科、木兰科、石蒜科、千屈菜科、蝶形花科、柿科各分离出3株,桑科、景天科、蔷薇科、胡桃科、杨柳科各分离出2株,红豆杉科、唇形科、木犀科、银杏科、梧桐科、锦葵科、香蒲科,各分离出1株菌株。说明Bt在不同科植物叶片中的分布是存在差异的。通过光学显微镜检测观察,分离Bt菌株的伴胞晶体呈现多种形态,主要以钝菱形、长菱形、方形为主;还存在不规则形、球形等其他的晶体类型,部分菌株还可以观察到多种晶体形态共存。采用PCR鉴定体系,利用10对通用引物,筛选出cry1、cry2、cry3、cry8、cry9和cry11六种基因型。其中,含有cry1类的菌株共检出48株,检出率最高,占75%。其次含cry2类基因22株,cry11类基因16株,cry9类12株,cry8类4株,cry3类3株。有些菌株仅含有单一的cry1或cry2或cry8基因,其它则呈现基因组合形式,如cry1+cry2型、cry2+cry8+cry11型等多种类型。新鲜叶片分离出36株,占总分离菌株的56.3%;老叶分离出28株,新叶片的分利率高于老叶片。从各个科的植物叶片分离出Bt多少来看,七叶树科分离最多,占总分离Bt菌的9.4%。利用SDS-PAGE方法,分析了 Bt分离株的Cry蛋白表达量,发现分子量在130 kDa、90 kDa、70 kDa、60 kDa的蛋白量最为丰富。通过胞晶混合物对小菜蛾生物活性测定发现,48株对小菜蛾幼虫有较好杀虫活性的菌株。其中154,289两个编号的菌株,在浓度为0.25 μg/mL时,对小菜蛾的校正死亡率达50%以上。本研究探索了不同科植物叶片、新老叶片,所分离到Bt菌株的规律,高毒力菌株的分布情况,为Bt菌株植物叶片分离提供了一定的指导意义。