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目的:探讨21个常染色体STR基因座及Amelogenin基因座在人食管鳞状细胞癌组织的变异类型和变异规律,为食管鳞状细胞癌组织的个体识别及亲权鉴定提供参考。方法:1样本收集:收集经病理学明确诊断的89例食管鳞状细胞癌患者的新鲜肿瘤组织及新鲜的癌旁对照组织。其中40例患者同时收集到对应的石蜡包埋的肿瘤组织和石蜡包埋癌旁组织。记录肿瘤患者的年龄、性别和肿瘤细胞分化程度等信息。2 DNA提取:采用酚-氯仿法提取新鲜组织的基因组DNA,TIANquick FFPE DNA Kit试剂盒提取石蜡包埋组织的基因组DNA。3 STR分型:采用AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒对提取的基因组DNA进行PCR扩增,扩增的STR基因座包含21个常染色体STR基因座和1个判断性别的牙釉基因座（Amelogenin）。采用AB3500遗传分析仪对PCR扩增产物进行毛细管电泳,通过Gene Mapper?ID-X软件进行STR分型。比较同一个体新鲜的肿瘤组织和癌旁组织、石蜡包埋的肿瘤组织和癌旁组织的STR分型结果,记录STR变异位点和类型。4 STR变异验证:用重复试验、不同试剂盒验证和扩增单基因座测序方法对变异的等位基因进行确认。5统计学分析:应用Excel、SPSS 23.0分别对上述实验结果进行记录和统计学分析。用计数法统计STR突变在各突变类型、基因座水平的个数。用?~2检验比较不同性别、年龄段、肿瘤细胞分化程度等的STR变异差异。结果:1新鲜食管鳞状细胞癌组织和癌旁对照组织DNA分型结果采用酚-氯仿法提取新鲜肿瘤组织及癌旁组织基因组DNA,采用AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒进行复合扩增,所有STR基因座均得到完整分型,且STR基因座等位基因峰高≥150RFU（相对荧光单位）。2新鲜肿瘤组织和癌旁对照组织STR变异检测结果89例新鲜食管鳞状细胞癌样本,采用AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒,有26例样本检出不同于癌旁组织的基因型改变(STR Genotype Alteration,STRGA),占食管鳞状细胞癌样本总数的29%。在21个常染色体STR基因座和Amelogenin基因座中,共发现252次等位基因变异,观察到四种变异类型,其中新等位基因(New alleles,Anew)检出7次、增加的等位基因(Additional alleles,Aadd)检出30次、完全杂合性丢失（Complete lost heterozygosity,LOH）检出1次和部分杂合性丢失（Partial lost heterozygosity,p LOH）检出214次。STR变异在FGA基因座出现最多（25次）,其次为Penta D基因座（17次）。四种变异类型中,新等位基因、增加的等位基因和完全杂合性丢失可引起基因型的改变(STR Genotype Alteration,STRGA),容易导致错误分型。在21个常染色体STR基因座和Amelogenin基因座中,STRGA检出38次,检出率为1.94%,最常见的STRGA是增加的等位基因,检出30次;在D2S1338、v WA、D3S1358、Penta E、D5S818、D6S1043、TPOX、D7S820、D8S1179、D12S391、CSF1PO、Penta D、D16S539、D18S51、FGA、D19S433、D21S11等17个法医学常用STR基因座均检出STRGA变异,其中D21S11、D12S391、v WA、FGA和D18S51基因座发生STRGA变异最多（均为4次）;D13S317、D2S441、TH01、D10S1248和Amelogenin等5个基因座未观察到STRGA变异。此外,同一份肿瘤组织,STRGA可能在多个STR基因座同时发生,我们观察到1例肿瘤组织在7个STR基因座同时检出STRGA变异,分别是D16S539、TPOX、D2S1338、D21S11、D6S1043、D12S391和FGA基因座。1例肿瘤组织在3个STR基因座检出STRGA变异。统计分析结果显示,食管鳞状细胞癌组织中,各变异类型的STR基因座变异率不同,STRGA基因座检出率在21个常染色体STR基因座有差异（P＜0.05）。3新鲜食管鳞状细胞癌样本的相关临床资料统计结合目前实验结果与食管鳞状细胞癌患者的临床资料分析,发现STRGA变异与患者的性别、年龄、肿瘤细胞分化程度差异均无相关性（P＞0.05）。4石蜡包埋组织的STR分型及变异检测结果使用TIANquick FFPE DNA Kit试剂盒,提取石蜡包埋的肿瘤组织和癌旁组织基因组DNA,采用AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒进行复合扩增,STR基因座等位基因峰高≥100RFU（相对荧光单位）计基因座检出率,21个常染色体STR基因座和Amelogenin基因座全部有等位基因检出视为个体分型成功。40例石蜡包埋肿瘤组织有29例STR分型成功,11例分型失败,共检出841个基因座,40例石蜡包埋癌旁对照组织有31例STR分型成功,9例分型失败,共检出843个基因座。石蜡包埋组织基因座检出率为95.68%,出现等位基因大片段丢失的有D18S51、D12S391等基因座。未检出的STR基因座主要为D2S441、D10S1248和D6S1043,其次为Penta D和Penta E基因座,其扩增片段长度均＞300bp。统计结果显示,新鲜组织个体分型成功率显著高于石蜡包埋组织（P＞0.05）。比较同一个体石蜡包埋癌旁组织与新鲜癌旁组织的STR分型结果,在成功分型的843个STR基因座,观察到有833个基因座的基因型一致,10个基因型不相同,表现为在新鲜癌旁组织STR基因型为杂合子,而石蜡包埋癌旁组织基因型为其中一个等位基因的纯合子。同样方式比较同一个体新鲜肿瘤组织和石蜡包埋肿瘤组织的STR分型结果,在成功分型的841个STR基因座,观察到有827个基因座的基因型相同,14个STR基因型不一致,表现为13个STR基因座在新鲜肿瘤组织基因型为杂合子,而石蜡包埋肿瘤组织基因型为纯合子;1个STR基因座在新鲜肿瘤组织为三等位基因,而在石蜡包埋组织基因型为其中两个等位基因的杂合子。40例石蜡包埋的食管鳞状细胞癌组织中,也观察到四种变异类型,其中Aadd8次,Anew3次,LOH 13次,p LOH 87次。结论:1本研究中,食管鳞状细胞癌组织在D3S1358、D16S539、Penta E等17个STR基因座均检出STRGA变异,说明该17个法医学常用的STR基因座在食管鳞状细胞癌组织中稳定性较差,不适用于该类肿瘤组织的个体识别和亲权鉴定。2本研究中,食管鳞状细胞癌组织未检测到STRGA变异的D13S317、D2S441、TH01、D10S1248和Amelogenin基因座,可作为食管鳞状细胞癌组织进行个体识别和亲权鉴定的备选基因座。在今后的研究中,需进一步验证是否可以将其纳入稳定的STR基因座,为肿瘤组织等特殊检材的身源鉴定提供依据。3本研究中,新鲜组织的STR基因座个体分型成功率高于石蜡包埋组织（P＜0.05）。在石蜡包埋组织观察到D18S51、D12S391等基因座出现大片段的等位基因丢失,D2S441、D10S1248、D6S1043等STR基因座分型失败,出现石蜡包埋组织和对照组织部分STR基因座分型不一致。在个体识别中,当石蜡包埋组织与对照组织分型结果不一致时,应慎重下结论。