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近年来,随着海水鱼养殖产业高密度集约化程度的不断提高,病害时有发生,已成为制约产业发展的主要因素之一。因此,如何在高密度和高效益养殖的同时,有效的预防和控制鱼病是当下迫切需要解决的问题。益生菌是一类添加足够量时给宿主带来健康益处的活性微生物,能够在促进动物生长、增强机体抗病和提高宿主免疫力等方面发挥良好的效果。芽孢杆菌（Bacillus）、乳酸菌（Lactic acid bacteria）等益生菌已被开发应用到海水鱼养殖中,但部分菌株的非鱼源性使得它们很难在养殖中高效地发挥作用。理想的益生菌来自于动物自身的胃肠道,因此,为筛选兼具产酶活力和抑制病原菌特性的海水鱼源益生菌,本研究以我国北方网箱养殖的经济鱼种许氏平鲉（Sebastes schlegelii）和大泷六线鱼（Hexagrammos otakii）为研究对象,通过肠道细菌的分离鉴定、特性分析和养殖应用试验,研究了益生菌作用于同源宿主对其生长性能、肠道消化酶、肝脏抗氧化酶及肠道菌群结构的影响,研究结果为海水鱼养殖产业提供了新的益生菌株,为进一步在生产中应用推广提供科学依据。1.海水鱼源潜在益生菌的筛选、鉴定及特性分析本研究对海捕野生许氏平鲉、大泷六线鱼消化道内壁粘膜样品进行了细菌分离纯化,获得80株可培养细菌。使用选择性培养基对菌株的产酶能力进行测定,选取海水鱼常见病原菌为指示菌测定分离菌株产物的抑菌活性,筛选出2株潜在益生菌TS2和TH8,并进行了菌株的生理生化检测、16S rDNA序列分析、生长特性及其对宿主安全性的研究。结果显示,TS2产蛋白酶（protease）、淀粉酶（amylase）和脂肪酶（lipase）,其无菌培养产物可显著抑制鳗弧菌（Vibrio anguillarum）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、哈维氏弧菌（Vibrio harvey）和假交替单胞菌（Pseudoalteromonas nigrifaciens）的生长。TH8产蛋白酶和脂肪酶,其无菌培养产物可显著抑制鳗弧菌、溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）、副溶血弧菌、假交替单胞菌、嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）和大肠杆菌（Escherichia coli）的生长。基于细菌生理生化检测和16S rDNA序列比对鉴定TS2为枯草芽孢杆菌,TH8为河流漫游球菌。生长特性表明TS2在温度15～40℃、Na Cl浓度0～8%、p H 5～9时生长较快,6 h进入对数期,26 h后进入稳定期;TH8在温度20～40℃、Na Cl浓度0～8%、p H 5～12时生长较快,2 h进入对数期,14 h后进入稳定期。菌株对同源宿主的安全性检测发现,TS2和TH8在10~8 CFU/m L浓度下对同源宿主是相对安全的。筛选的枯草芽孢杆菌TS2、河流漫游球菌TH8产酶能力强,其产物能抑制多种病原菌的生长,具有广温广盐、耐酸碱、生长速度快等优点,可作为候选菌株开发为微生态制剂。2.TS2对许氏平鲉幼鱼生长性能、肠道消化酶、肝脏抗氧化酶及肠道菌群结构的影响本研究将不同浓度的TS2应用于许氏平鲉幼鱼,养殖周期为56 d,分别观察28 d和56 d各组许氏平鲉幼鱼的生长性能、肠道消化酶、肝脏抗氧化酶及肠道菌群结构的变化。结果显示,各实验组的末平均体重显著高于对照组,TS2添加量为1×10~6CFU/g时可显著提高许氏平鲉幼鱼的增重率,添加量为1×10~5CFU/g和1×10~6CFU/g时可显著提高许氏平鲉幼鱼的特定生长率。在肠道消化酶方面,28 d时,TS2添加量为1×10~7CFU/g时可显著提高胰蛋白酶活力,添加量为1×10~5CFU/g和1×10~7CFU/g时可显著提高α-淀粉酶活力,添加量为1×10~6CFU/g和1×10~7CFU/g时可显著提高脂肪酶活力;56 d时,各实验组均可显著提高胰蛋白酶活力、α-淀粉酶活力和脂肪酶活力。在肝脏抗氧化酶方面,28 d时,TS2的添加量为1×10~5CFU/g和1×10~7CFU/g时可显著提高超氧化物歧化酶活力,各实验组均可显著提高过氧化氢酶活力;56 d时,TS2的添加量为1×10~6CFU/g和1×10~7CFU/g时可显著提高超氧化物歧化酶活力,各实验组均可显著提高过氧化氢酶活力。在肠道菌群结构方面,TS2的加入会显著影响许氏平鲉肠道微生物的多样性,28 d时,TS2添加量为1×10~6CFU/g时可显著增加有益菌沉积杆菌属的数量,Methylovirgula的比例随着TS2浓度的增加先降低后升高;56 d时,TS2添加量为1×10~5CFU/g时也可显著增加有益菌沉积杆菌属的数量,并可显著降低有害菌慢生根瘤菌属的数量,Methylovirgula的比例随着TS2浓度的增加先升高后降低;实验全期罗丹杆菌属的比例先下降后升高。因此,枯草芽孢杆菌TS2能够促进许氏平鲉幼鱼生长,显著提高肠道消化酶活力、肝脏抗氧化酶活力,丰富肠道菌群多样性,增加有益菌数量、降低有害菌数量。3.TH8对大泷六线鱼幼鱼生长性能、肠道消化酶、肝脏抗氧化酶及肠道菌群结构的影响本实验将不同浓度的TH8应用于大泷六线鱼幼鱼,养殖周期为56 d,分别观察28 d和56 d各组大泷六线鱼幼鱼的生长性能、肠道消化酶、肝脏抗氧化酶及肠道菌群结构的变化。结果显示,TH8添加量为1×10~7CFU/g时可显著提高大泷六线鱼末平均体重、增重率和特定生长率。在肠道消化酶方面,28 d时,TH8添加量为1×10~6CFU/g和1×10~7CFU/g时可显著提高胰蛋白酶活力,各实验组均可显著提高α-淀粉酶活力和脂肪酶活力;56 d时,各实验组均可显著提高胰蛋白酶活力、α-淀粉酶活力。在肝脏抗氧化酶方面,28 d时,TH8添加量为1×10~6CFU/g和1×10~7CFU/g时可显著提高超氧化物歧化酶活力和过氧化氢酶活力;56 d时,TH8添加量为1×10~6CFU/g和1×10~7CFU/g时可显著提高超氧化物歧化酶活力,各实验组均可显著提高过氧化氢酶活力。在肠道菌群结构方面,TH8可显著提高大泷六线鱼幼鱼肠道菌群的多样性,此外,28 d时,TH8添加量为1×10~6CFU/g时可显著降低罗丹杆菌属的数量,随着YH8浓度的增加,慢生根瘤菌属、沉积杆菌属、罗丹杆菌属及Methylovirgula比例基本不变;而在56 d时,TH8添加量为1×10~7CFU/g时可显著增加罗丹杆菌属的数量,随着YH8浓度的增加,沉积杆菌属逐渐降低、罗丹杆菌属逐渐升高、Methylovirgula先升高后降低。由此可见河流漫游球菌TH8不仅可以显著提高肠道消化酶活力、肝脏抗氧化酶活力,而且能够显著提高肠道菌群的多样性,这可能是TH8促进大泷六线鱼幼鱼生长的主要因素。综上,本研究从野生许氏平鲉、大泷六线鱼消化道分离筛选出两株益生菌TS2和TH8,其产酶能力强,抑菌效果好,具有广温广盐、耐酸碱、生长速度快等优点,在同源宿主养殖中应用,可促进机体生长,提高消化酶活力、肝脏抗氧化酶力,丰富肠道菌群结构多样性。研究结果为益生菌的研发和在海水鱼中的应用提供数据参考。