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研究目的:揭示TLRs信号通路调控T淋巴细胞免疫异常激活的作用机制,通过中药益艾康对HIV/AIDS肺脾气虚证患者的干预,观察TLRs信号通路调控T淋巴细胞免疫异常激活相关基因表达变化,从而明确中药益艾康对HIV/AIDS患者免疫功能调节的作用机制,推动艾滋病新药的研发和临床推广。研究方法:应用流式细胞术、RT-PCR等方法对健康对照组、HIV/AIDS无证可辨组和HIV/AIDS肺脾气虚组患者的T淋巴细胞亚群、TLRs信号通路及免疫激活相关基因表达等指标进行检测,揭示TLRs信号通路调控T淋巴细胞免疫异常激活的作用机制;应用中药益艾康胶囊对HIV/AIDS肺脾气虚患者进行干预,观察HIV/AIDS肺脾气虚患者TLRs信号通路调控T淋巴细胞免疫异常激活相关基因的表达变化。研究结果:1.三组间基线T淋巴细胞亚群比较:HIV/AIDS肺脾气虚组CD4+细胞计数低于健康对照组但差异无统计学意义,HIV/AIDS无证可辨组的CD4+细胞计数显著低于健康对照组,差异有统计学意义。HIV/AIDS肺脾气虚组和HIV/AIDS无证可辨组两组的CD8+细胞计数高于健康对照组,但差异无统计学意义。HIV/AIDS肺脾气虚组和HIV/AIDS无证可辨组两组CD4+/CD8+比值均显著低于健康对照组,差异有统计学意义。HIV/AIDS肺脾气虚组和HIV/AIDS无证可辨组两组的CD28+CD4+比率显著低于健康对照组,差异有统计学意义,CD28+CD8+比率均低于健康对照组,但差异无统计学意义。HIV/AIDS肺脾气虚组和HIV/AIDS无证可辨组两组的CD38+CD4+比值高于健康对照组,但差异无统计学意义,CD38+CD8+值显著低于健康对照组。HIV/AIDS肺脾气虚组和HIV/AIDS无证可辨组两组的HLA-DR+CD4+比值显著高于健康对照组,差异有统计学意义,HLA-DR+CD8+比值高于健康对照组,但差异无统计学意义。HIV/AIDS肺脾气虚组和HIV/AIDS无证可辨组两组的Treg显著高于健康对照组,差异有统计学意义。2.HIV/AIDS肺脾气虚组治疗前后T淋巴细胞亚群比较:HIV/AIDS肺脾气虚组疗前疗后的CD3+T淋巴细胞计数、CD4+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数、CD4+/CD8+比值比较,差异均无统计学意义。HIV/AIDS肺脾气虚组疗后CD38+CD4+比值显著低于疗前,差异有统计学意义,CD38+CD8+比值低于疗前,但差异无统计学意义。HIV/AIDS肺脾气虚组疗后的HLA-DR+CD4+、HLA-DR+CD8+比值均显著高于疗前,差异有统计学意义。HIV/AIDS肺脾气虚组疗后的Treg显著低于疗前,差异有统计学意义。3.HIV/AIDS肺脾气虚组治疗前后中医证候积分变化:HIV/AIDS肺脾气虚组治疗后证候总积分较疗前明显降低,治疗前证候总积分为29.61±5.88,治疗后证候总积分为:14.17±6.27,差异有统计学意义。4.疗前三组间免疫激活相关基因表达结果比较:HIV/AIDS肺脾气虚组与健康对照组基因对比显示IL8、TLR4、My D88、IRAK1、NFKBIA、TNFAIP3、IL1B、IKBKB各基因都上调,但均不显著。HIV/AIDS无证可辨组与健康对照组相关基因对比显示IL8、IRAK1、TNFAIP3基因下调,TLR4、My D88、NFKBIA、IL1B、IKBKB各基因上调,但不显著。HIV/AIDS肺脾气虚组与HIV/AIDS无证可辨组相关基因对比显示IL8、TLR4、My D88、IRAK1、NFKBIA、TNFAIP3、IL1B、IKBKB各基因都上调,但不显著。HIV/AIDS组与健康对照组免疫相关基因对比显示IL8基因下调,TLR4、My D88、IRAK1、NFKBIA、TNFAIP3、IL1B、IKBKB各基因上调,但不显著。5.HIV/AIDS肺脾气虚组疗前疗后基因表达结果比较:HIV/AIDS肺脾气虚组疗后较疗前相关基因IL8、TLR4、My D88、IRAK1、NFKBIA、TNFAIP3、IL1B、IKBKB的表达都下调,但不显著。6.HIV/AIDS肺脾气虚证免疫激活相关基因表达与T淋巴细胞免疫激活指标相关性分析结果显示IL8、IRAK1、IKBKB与CD38+CD4+呈显著负相关,IRAK1、NFKBIA、TNFAIP3、IKBKB与CD38+CD8+呈显著负相关,IRAK1与HLA-DR+CD8+呈显著负相关。HIV/AIDS无证可辨组免疫激活相关基因表达与T淋巴细胞免疫激活指标相关性分析结果显示IL8与CD38+CD4+呈显著负相关,IKBKB与CD28+CD8+呈显著负相关。健康对照组免疫相关基因表达与T淋巴细胞免疫激活指标相关性分析结果显示MYD88与CD28+CD4+呈显著正相关、IRAK1与CD28+CD4+呈显著负相关、NFKBIA与CD38+CD4+呈显著负相关,与HLA-DR+CD8+呈显著正相关HIV/AIDS肺脾气虚证疗后免疫相关基因表达与T淋巴细胞免疫激活指标相关性分析结果显示:MYD88与CD38+CD8+呈显著负相关。研究结论:1)益艾康胶囊能有效改善HIV/AIDS肺脾气虚证患者的临床症状及T淋巴细胞激活亚群的分布,改善其免疫激活水平,具有双向调节作用。其功能的发挥可能与TLRs信号通路的调控有关,涉及IL8、TLR4、My D88、IRAK1、NFKBIA、TNFAIP3、IL1B、IKBKB这些基因表达。2)HIV/AIDS肺脾气虚组患者较健康对照组患者TLRs相关各免疫激活相关因子TLR4、My D88、IRAK1、NFKBIA、TNFAIP3、IL1B、IKBKB表达上调,服用益艾康治疗后该组患者上述基因均下调,提示益艾康胶囊发挥增强HIV/AIDS肺脾气虚患者免疫功能的作用可能是通过下调这些因子表达实现的。