免疫亲和萃取是一种高效选择性分离和纯化复杂体系中微量成分的方法。与目前普遍使用的固相萃取吸附剂相比，免疫亲和萃取可以更有效地去除复杂样品基底中的干扰物质并实现目标物的富集，对提高分析方法的选择性和灵敏度都十分有利。本论文对免疫亲和吸附剂抗体的定向偶联方法、可在线使用的新型固相载体的制备方法和性能，及多目标免疫亲和分离富集方法等方面进行了详细研究。 论文内容主要包括以下几个部分： 第一章首先综述了免疫亲和色谱常用固相载体材料的性能特点、活化方法和与抗体的连接技术以及免疫亲和色谱法在生物、药物、食品和环境等复杂样品的分离纯化方面的研究和应用进展。指出了目前免疫亲和色谱在抗体固定化方法和在线使用等方面存在的问题和不足。 第二章进行了定向偶联抗体法制备免疫亲和柱的研究。以CNBr活化的Sepharose4B为固相载体，通过NaIO4氧化罂粟碱抗体的Fc端的糖残基，将抗体定向化地偶联在载体上，成功制备了罂粟碱免疫亲和柱。研究结果表明，在4℃、以纯水作为上样溶剂的条件下罂粟碱的保留效果最佳。以纯水为淋洗溶剂，甲醇-水(80:20)为洗脱溶剂，利用优化后的吸附-解吸条件测得标样经免疫亲和柱纯化后的回收率在87％以上。免疫亲和柱上固定化抗体的摩尔吸附容量为0.2mol抗原/mol抗体，与随机偶联抗体法制得的免疫亲和柱(0.04mol抗原/mol抗体)相比有显著提高。将制备的免疫亲和柱应用于中药罂粟壳中罂粟碱的富集纯化，可以有效去除样品中的绝大部分基底干扰物，方法的选择性和灵敏度都明显提高。 第三章利用自行合成的甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)/二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)有机聚合物整体柱材料和高特异性的双酚A的多克隆抗体，制备了可在线用于高效液相色谱仪的双酚A(BPA)的刚性免疫亲和整体柱(MIAC)。考察了MIAC的在线使用条件，确定最佳流速为0.5mL/min，最佳富集体积为30mL。以纯水为上样和淋洗溶剂，70％甲醇水溶液为洗脱和高效液相色谱(HPLC)的流动相，建立了MIAC-LC-MS在线分析体系，实现了复杂环境水样中痕量双酚A的自动化纯化富集与分析，方法的检测限可达1.6pg/mL。 第四章改进了拟除虫菊酯类农药半抗原的合成反应，制备了拟除虫菊酯类农药的通用型抗体，并采用新型柱材料GMA/EDMA获得了可用于同时结合多种拟除虫菊酯化合物的多目标免疫亲和整体柱。选择纯水为上样和淋洗溶剂，70％甲醇水溶液为洗脱溶剂，83％乙腈水溶液为HPLC流动相，验证了MIAC对于四种抗原目标物溴氰菊酯、氯菊酯、氟氰戊菊酯、氟氰菊酯的特异性吸附保留。建立了MIAC-HPLC在线分析体系，初步实现了复杂样品茶叶中4种拟除虫菊酯农药残留的同时纯化与分析。 本论文的研究结果为提高免疫亲和色谱的选择性和结合容量，推动免疫亲和色谱向在线化、微型化和多样化等方面的发展奠定了良好的基础。