辐照对ATP生物发光法检测脱水蔬菜中细菌含菌量的影响

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ATP(adenosine triphosphate,三磷酸腺苷又称腺苷三磷酸)生物发光测定技术具有方便、快捷等特点,加之对ATP测定的特异性和高灵敏度,因而在临床医学的细菌检验方面得到了广泛的应用,并为世界卫生组织(WHO)所确认,目前这一技术在发达国家已越来越多地用于细菌的检验。应用ATP生物发光技术测定细菌方法的理论基础在于ATP普遍存在于包括细菌在内的一切活细胞内,并且在一定条件下其含量相对稳定,当细菌死亡时体内的ATP将被自身的酶所降解,从而使得ATP的存在成为检测样品中有无细菌的依据;在定量测定ATP的方法中,以荧光素—荧光素酶测定法最为灵敏,当所有反应物过量时,其发光强度与ATP的数量成正比,因此根据细菌ATP提取液的发光强度即可推算出样品含菌量的多少。但高岳等(2007)在应用ATP生物发光技术检测脱水香葱和胡椒粉的辐照灭菌效果时,却出现了样品细菌ATP提取液的发光强度均高于对照,与实际含菌量动态变化不一致的现象,其影响机理尚不清楚,目前也未见报道。为了使ATP生物发光检测技术能在产品的辐照灭菌效果方面得以应用,本文围绕辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响进行了研究,结果表明:1、应用ATP生物发光技术分别检验辐照处理后脱水蔬菜中的含菌量,均出现了发光强度与实际含菌量两者动态变化不一致的现象,说明了辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响具有普遍性。2、通过光谱分析可以看出:1)辐照前、后样品细菌ATP提取液生物发光光谱的波长范围相同,光谱峰值对应的波长也无显著差异,依据以上两个光谱特征分析,辐照并未改变样品的发光性质,由此可以认定辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响是通过ATP生物发光系统表现出来的。2)辐照对样品细菌ATP提取液生物发光光谱的峰值产生了影响。光谱曲线峰值的升高,说明辐照处理增加了样品细菌ATP提取液中ATP的浓度。3、对高温灭菌后的脱水蔬菜进行辐照处理,并应用ATP生物发光技术检测样品的发光强度,结果表明辐照后的脱水蔬菜材料本身并没有对ATP的生物发光强度产生影响;而应用ATP生物发光技术检测辐照处理后大肠杆菌菌液的含菌量时,却出现了发光强度与实际含菌量不一致的现象,说明辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响来自于辐照处理后的细菌。4、辐照处理后大肠杆菌菌液样品中游离ATP的发光强度均极显著的高于对照。发光强度的升高说明辐照处理已明显的增加了样品中游离ATP的数量。辐照处理并未增加LB无菌培养液ATP的生物发光强度,样品中增加的游离ATP只能来自于辐照后的大肠杆菌。5、对大肠杆菌总ATP酶活性的测定结果显示辐照剂量越大、样品总ATP酶的活性就越低。ATP酶是分解ATP的专一性酶,ATP酶活性的降低,使死亡细菌体内ATP的降解受阻,增加了样品中游离ATP的数量。6、在去除样品中游离ATP后,样品细菌ATP提取液的生物发光强度与样品的含菌量两者的动态变化已趋于一致,由此可以说明辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响是由于样品中游离ATP浓度的增加所造成的。综上所述,辐照对脱水蔬菜细菌ATP生物发光检测的影响是由于电离辐射在杀灭样品中细菌的同时,也降低了细菌体内ATP酶的活性,使死亡细菌体内的ATP不能随细菌的死亡而迅速降解,并从细菌体内扩散出来,从而增加了样品中游离ATP的数量,导致了细菌ATP提取液的发光强度与实际含菌量动态变化趋势的不一致。因此在应用ATP生物发光技术检测产品的辐照灭菌效果时必须考虑样品中游离ATP对检测所带来的影响。本研究对拓宽ATP生物发光检测的应用领域、完善ATP生物发光检测的方法具有一定的理论和实际意义。
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