【摘 要】
：
为研究环状RNA（circ RNA）对隆林山羊肌肉发育的作用机制,本研究选择1月龄、10月龄的隆林山羊背最长肌为测序材料。通过RNA-seq技术筛选差异表达circ RNAs,并利用生物信息学分析方法对差异circ RNA的来源基因进行功能富集分析;同时,以隆林山羊骨骼肌卫星细胞为材料,利用过表达和干扰技术、EDU、CCK8、免疫荧光、RT-q PCR等方法,对在不同阶段背最长肌中筛选到的差异表达
论文部分内容阅读
为研究环状RNA（circ RNA）对隆林山羊肌肉发育的作用机制,本研究选择1月龄、10月龄的隆林山羊背最长肌为测序材料。通过RNA-seq技术筛选差异表达circ RNAs,并利用生物信息学分析方法对差异circ RNA的来源基因进行功能富集分析;同时,以隆林山羊骨骼肌卫星细胞为材料,利用过表达和干扰技术、EDU、CCK8、免疫荧光、RT-q PCR等方法,对在不同阶段背最长肌中筛选到的差异表达circ RNA-circ LOC102191280进行功能验证,主要结果如下。1.本试验成功构建6个circ RNA测序文库,经数据过滤获得356,167,236条clean reads,其中有82.67%～90.12%clean reads能比对到山羊基因组上,有56.67%～68.6%的序列具有基因单一位置。在1月龄和10月龄山羊背最长肌中共鉴定到26212个circ RNAs,有531个circ RNAs在2个不同阶段差异表达,其中274个上调,257个下调。通过GO和KEGG功能富集分析差异circ RNA的来源基因,GO富集结果显示circ RNA的来源基因参与细胞组分、酶活性变化、生物发生、新陈代谢等,KEGG富集显示circ RNA来源基因参与c GMP-PKG、催产素信号通路、脂肪酸伸长、钙离子信号通路、黏附连接等重要通路。2.利用PCR、Sanger测序、RT-q PCR等技术手段,验证6个circ RNA的成环位点和相对表达趋势,结果显示6个circ RNA具有成环结构,q RT-PCR检测的circ RNA表达趋势与测序公司提供的结果一致。3.circ-0029745来源于LOC120191280宿主基因的4-6号外显子,长532bp,因此,命名为circ LOC102191280。一代测序和RNase消化实验证实circ LOC102191280真实存在。RT-q PCR结果显示circ LOC102191280过表达后,相关增殖基因PCNA、CDK2的表达量显著上升（p＜0.05）,相关分化基因Myo D、Myo G、Myf5、My HC表达量显著下降（p＜0.05）;干扰circ LOC102191280,结果相反,说明circ LOC102191280对隆林山羊骨骼肌卫星细胞增殖分化有显著影响,促进细胞增殖、抑制分化。4.通过核质分离实验定位circ LOC102191280在细胞中的位置,结果显示circ LOC102191280在细胞质和细胞核均有分布,细胞质比例51%,细胞核比例49%,说明circ LOC102191280可以发挥竞争性结合mi RNA的作用。RNAhybrid预测结果显示circ LOC102191280与mi R-214-5p具有潜在结合位点,双荧光素酶报告实验证实circ LOC102191280与mi R-214-5p具有结合位点。利用RT-q PCR、CCK8、EDU、免疫荧光实验,发现mi R-214-5p过表达后,增殖基因PCNA、CDK2的表达量显著下降（p＜0.05）,分化基因Myo D、Myo G、Myf5、My HC表达量显著上升（p＜0.05）,而当circ LOC102191280过表达时,可以逆转这种效应。说明circ LOC102191280与mi R-214-5p之间存在ce RNA作用机制,共同调控山羊骨骼肌卫星细胞的增殖分化。5.RNAhybrid预测结果显示mi R-214-5p与IGFBP5具有潜在结合位点,双荧光素酶报告实验证实两者之间存在相互作用。增殖期,mi R-214-5p过表达时,IGFBP5的表达量极显著降低（p＜0.01）,而当circ LOC102191280过表达时,IGFBP5的表达量显著升高（p＜0.05）。分化期,mi R-214-5p过表达时,IGFBP5的表达量极显著升高（p＜0.01）,而当circ LOC102191280过表达时,IGFBP5的表达量显著降低（p＜0.05）,说明circ LOC102191280通过吸附mi R-214-5p调控IGFBP5的表达。结论:通过1月龄和10月龄隆林山羊背最长肌测序、生物信息学分析、筛选出与肌肉生长发育相关的circ LOC102191280,并验证了circ LOC102191280可以通过竞争性结合mi R-214-5p调控IGFBP5表达的新ce RNA机制,参与隆林山羊骨骼肌卫星细胞增殖分化的调控,为探究环状RNA在山羊肌肉发育中的分子机制提供理论参考。
其他文献
水牛（Bubalus bubalis）是适应南方气候的重要家畜品种,具有广阔的经济开发价值。水牛奶因其营养价值丰富、产品附加值高被誉为“奶中之王”,水牛奶业已成为我国南方奶业的重要组成部分。但是,水牛养殖过程中药物滥用导致水牛奶中残留药物,对人类健康造成威胁。另一方面,水牛奶源掺假问题也被社会普遍关注。因此,检测水牛奶中药物残留和奶源成分是保障动物源食品安全的关键环节,亟待开发出灵敏有效的分析方法
＜正＞识字教学是小学语文第一学段教学的重要任务之一，也是对学生进行思维训练的重要环节。统编版小学语文教材采取集中识字与随文识字相结合的方式达成识字目标。识字的形式多种多样，如韵语识字、字理识字、事物归类识字、生活识字、查字典识字等。所谓字理识字，是从汉字构字原理上对汉字音、形、意之间的联系进行字理分析，使学生理解字的构形、读音、表意的道理的识字方法。它能激发学生识字的兴趣，提高学生识字的效率，提升
自噬是卵母细胞发育成熟过程中至关重要的生物过程。2-巯基乙醇（2-Mercaptoethanol,2-ME）常被用作一种抗氧化剂来优化家畜卵母细胞体外成熟培养体系,但目前尚缺乏其对猪卵母细胞体外成熟过程自噬影响的系统研究。基于此,本研究假设2-ME可以通过维持自噬稳态来促进卵母细胞的体外成熟。为了验证这一假设,我们以猪为研究对象,探索了 2-ME对自噬抑制或过度激活的猪卵母细胞体外成熟效果的研究。
研究进口阻垢合金微观组织及阻垢机理对于解决污垢导致的能源浪费及设备损坏等问题有重要意义。研究了一种进口阻垢合金的成分、微观组织、阻垢性能及机理。研究表明，阻垢合金的主要成分为铜、锌、镍，含有微量的锡、铅、铁、锰、铬、铌、硅；合金的阻垢率在50%到70%之间，改变铜锌合金数量、间距和改变循环水的流量都会影响铜锌合金的防垢阻垢性能。合金在水处理过程中，以锌离子为主的阳离子由铜锌合金的微小原电池反应析出
目前诱导多能干细胞（i PSCs）在疾病模型以及生物医学等研究中的应用逐渐广泛,但是对于大动物尤其水牛诱导多能干细胞的研究仍然不足,为了进一步探究水牛成纤维细胞重编程机理,理解OCT4（O）、SOX2（S）、LIN28（L）和NANOG（N）四因子对水牛胎儿皮肤成纤维细胞重编程产生的影响,本课题基于2A肽的自剪切作用,利用慢病毒过表达载体PLVX＿IRES-Zs Green构建了过表达OCT4和L
脂肪品质与肉类营养、保质期和感官特性等密切相关,是影响猪肉品质和产品质量的重要因素,但与其他肉类品质性状（如肌内脂肪、p H值、系水力和肉色）相比,脂肪品质性状（如脂肪颜色和硬度）在过去的研究中受到的关注较少。本研究从基因组水平和转录组水平探究影响北京黑猪背部脂肪品质性状（脂肪颜色和硬度）的重要候选基因,并利用直接测序法筛出重要候选基因中重要的变异位点。获得的主要研究结果如下:1.利用GEMMA软
哺乳动物卵巢上有数以千计的卵泡,但在卵泡发育过程中大部分的卵泡都会发生闭锁,影响雌性动物繁殖力,造成优良雌性资源的浪费。颗粒细胞的凋亡是引起卵泡闭锁的主要原因之一,因此探究颗粒细胞的凋亡对提高雌性动物繁殖力至关重要。内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress）可以诱导细胞凋亡,影响细胞正常功能。然而,内质网应激在水牛（Bubalus bubalis）颗粒细胞的凋亡和功能中
水牛是一种优良的种质资源,是公认的最具有开发潜力和价值的家畜之一。但雄性水牛的繁殖力低于其他牛属物种,其中一个主要的原因是精子发生异常,这在一定程度上阻碍了水牛资源的开发。支持细胞（Sertoli Cells,SCs）是维持正常精子发生必不可少的一类体细胞,通过紧密连接、间隙连接和外质特化等方式构成血-睾丸屏障,在维持雄性繁殖力方面发挥重要作用。自噬是维持细胞稳态的重要机制,可以通过维护外质特化的
脂质代谢能为细胞增殖、卵母细胞成熟、受精和后续胚胎发育提供必要的能量。SIRT1有ADP-核糖转移酶和底物特异性脱乙酰酶活性,在体细胞及生殖细胞中表达广泛,在细胞增殖、分化、凋亡和糖脂代谢方面具有重要作用。目前对SIRT1是否参与调节卵母细胞脂质代谢还未见报道,为此,本试验以猪卵母细胞为原材料,通过添加SIRT1激活剂,利用免疫组化、q RT-PCR等方法了解SIRT1基因表达与卵母细胞脂质代谢的
随着经济快速发展,我国对电力能源的需求不断攀升。在绿色发展理念的指导下,我国加大了对核电等新型清洁能源的开发和投入,核电工程等相关建设迎来了巨大的发展机遇。钢筋混凝土厚板构件作为核电工程结构中的重要组成构件之一,由于其尺寸大、混凝土强度高的特点,在实际建造过程中极易出现混凝土的开裂现象。考虑到核安全的重要性,针对厚板构件的相关裂缝问题的研究具有重要的现实意义和广阔的应用前景。文章就厚板构件中的竖向