【摘 要】
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自噬是卵母细胞发育成熟过程中至关重要的生物过程。2-巯基乙醇（2-Mercaptoethanol,2-ME）常被用作一种抗氧化剂来优化家畜卵母细胞体外成熟培养体系,但目前尚缺乏其对猪卵母细胞体外成熟过程自噬影响的系统研究。基于此,本研究假设2-ME可以通过维持自噬稳态来促进卵母细胞的体外成熟。为了验证这一假设,我们以猪为研究对象,探索了 2-ME对自噬抑制或过度激活的猪卵母细胞体外成熟效果的研究。
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自噬是卵母细胞发育成熟过程中至关重要的生物过程。2-巯基乙醇（2-Mercaptoethanol,2-ME）常被用作一种抗氧化剂来优化家畜卵母细胞体外成熟培养体系,但目前尚缺乏其对猪卵母细胞体外成熟过程自噬影响的系统研究。基于此,本研究假设2-ME可以通过维持自噬稳态来促进卵母细胞的体外成熟。为了验证这一假设,我们以猪为研究对象,探索了 2-ME对自噬抑制或过度激活的猪卵母细胞体外成熟效果的研究。研究结论如下:（1）2-ME对3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）暴露的猪卵母细胞体外成熟及其孤雌胚胎发育的影响为了探究3-MA对卵母细胞体外成熟的影响,通过添加不同浓度3-MA（0,0.1,1,10,100 mM）至培养液,结果发现第一极体排出率随3-MA浓度提高逐渐降低,其中1 mM 3-MA可以显著降低卵母细胞的极体排出率,猪卵细胞自噬下调,卵丘扩展异常,细胞骨架完整性受损,线粒体功能障碍,脂滴增加,ROS上升以及早期凋亡增加,最终导致卵母细胞成熟受阻及其孤雌胚胎发育质量下降。随后添加不同浓度的 2-ME（0,10,25,50,100 μM）至 1 mM 的 3-MA 的培养液中,发现添加25 μM2-ME能显著缓解卵母细胞因3-MA暴露导致自噬抑制带来的一系列损伤,并促进其孤雌胚胎的发育。（2）2-ME对雷帕霉素（Rapamycin）暴露的猪卵母细胞体外成熟及其孤雌胚胎发育的影响为了探究Rapamycin对卵母细胞过度激活自噬的影响,添加不同浓度的Rapamycin（0,1,2,4 nM）到培养液中,结果发现浓度为2 nM Rapamycin显著下降卵母细胞体外的极体排出率,结果发现Rapamycin猪卵细胞中自噬出现了上调,细胞骨架完整性受损、线粒体功能产生障碍、活性氧以及早期凋亡增加,最终导致卵母细胞成熟培养受阻及其后期胚胎发育质量下降。随后添加不同浓度的2-ME浓度（0,10,25,50,100μM）到含有 2 nMRapamycin 的培养液中,发现添加25 μM 2-ME后能有效减缓因Rapamycin暴露导致自噬过度激活带来的一系列损伤,并促进其孤雌胚胎的发育。总之,本研究证实2-ME可通过维持猪卵母细胞自噬稳态促进卵母细胞体外成熟。本研究能为2-ME的机制研究提供一个新的视角,对猪卵母细胞成熟系统的优化提供重要的理论和实践价值。
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