【摘 要】
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目前诱导多能干细胞（i PSCs）在疾病模型以及生物医学等研究中的应用逐渐广泛,但是对于大动物尤其水牛诱导多能干细胞的研究仍然不足,为了进一步探究水牛成纤维细胞重编程机理,理解OCT4（O）、SOX2（S）、LIN28（L）和NANOG（N）四因子对水牛胎儿皮肤成纤维细胞重编程产生的影响,本课题基于2A肽的自剪切作用,利用慢病毒过表达载体PLVX＿IRES-Zs Green构建了过表达OCT4和L
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目前诱导多能干细胞（i PSCs）在疾病模型以及生物医学等研究中的应用逐渐广泛,但是对于大动物尤其水牛诱导多能干细胞的研究仍然不足,为了进一步探究水牛成纤维细胞重编程机理,理解OCT4（O）、SOX2（S）、LIN28（L）和NANOG（N）四因子对水牛胎儿皮肤成纤维细胞重编程产生的影响,本课题基于2A肽的自剪切作用,利用慢病毒过表达载体PLVX＿IRES-Zs Green构建了过表达OCT4和LIN28基因的载体PLVX＿OL以及过表达SOX2和NANOG基因的载体PLVX＿SN。然后将这两种载体分别以及共同导入水牛胎儿皮肤成纤维细胞,从不同角度验证这三组细胞中多能相关等基因的表达情况,运用RNA-seq技术和生物信息学分析技术对不同组别细胞进行转录水平上的分析。结果表明OCT4、LIN28、SOX2与NANOG因子组合在BSF中的过表达可以激活MAPK通路、LIF通路、MAPK通路以及PI3K等信号通路;显著表达OCT4、SOX2、NANOG、LIN28A、KLF4、FGF2、LIF、LIFR、WNT5A、WNT11、WNT2B、BMP4和FZD3等多能因子;显著上调TJP1（ZO-1）和CTNNA1等上皮标记基因,显著下调SNAI1、CD44、ZEB1、THY1等成纤维细胞的标记基因,可见BSF＿OSLN细胞已经开始进入MET状态,处于重编程初期。而过表达OCT4与LIN28的细胞与过表达SOX2与NANOG的细胞,其表达模式更接近于成纤维细胞本身。上述结果说明使用OSLN的转录因子组合能获得i PSCs重编程初期的细胞,后续有望通过筛选促进重编程的小分子化合物,进一步探究水牛体细胞重编程的分子机理以及获得稳定传代的水牛i PSCs奠定一定的基础。
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