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巴贝斯虫是一类蜱传性寄生于红细胞内的血液原虫，能对各种家畜和人造成严重危害。临床上表现出贫血、发热、黄疸、血红蛋白尿等。随着生物技术的发展，目前已经建立了多种用于检测巴贝斯虫的方法，然而各种方法各有利弊，需要更敏感、快速、简单的诊断方法。为此，本研究建立了套式PCR检测方法，并利用该方法对豫西地区宠物犬只血液样品的血液原虫进行鉴定和流行病学调查。⑴犬的巴贝斯虫套式PCR检测方法的建立。本研究根据GenBank中收录的犬的巴贝斯虫18S rRNA基因序列，设计合成三组6对特异性诊断引物，利用实验室中原有阳性标准品选出最优组引物并建立套式PCR诊断方法。⑵利用套式PCR方法，对豫西地区(洛阳、平顶山、三门峡)各个县市共20个动物医院，15个大中型犬场(大于等于30只)的宠物犬进行调查，共采集犬血样2960份，捕捉媒介蜱虫813只。采用常规染色法、常规PCR法、套式PCR法进行检测，并计算犬的巴贝斯虫感染率。运用SZM系列体视显微镜进行形态学进行蜱虫观察，以鉴定传播犬巴贝斯虫病的媒介中蜱虫的种类。⑶将随机抽取的25份阳性样品送至华大基因科技服务有限公司进行测序，测序结果先用NCBI中的BLAST进行核酸同源性比较，用DNA Star5.0软件联合BioEdit软件进行系统分析构建进化树。结果显示：最优一组引物PCR为上游: GGCTTTCGGTGATTCATA,下游:CCTTCCGTCAATTCCTTT, nPCR上游: TGGACCATTCAAGTTTCTG，下游:TCGTCTTCGATCCCCTA，用该组引物建立了套式PCR检测方法，扩增出外引物片段为858bp，内引物片段为658bp。该方法具有良好的特异性，用该方法不能扩增出附红细胞体，巴氏杆菌DNA等阴性样品；同时该方法具有较高多的灵敏度，最低能扩增出含10拷贝的阳性样品；本研究调查发现，豫西地区宠物犬中犬的巴贝斯虫感染率为3.89%；随机抽取的25株致病株均为吉氏巴贝斯虫，致病株基因序列与美洲的18S rRNA(JX112784)同源性达100%，与亚洲株18S rRNA(KF878944/KF171474/AB478328/AB478330)同源性为98.8%；而在豫西地区犬的巴贝斯虫媒介以镰形扇头蜱为主(52.4%)，蜱虫带虫率为2.33%。结论：⑴本实验成功建立了犬巴贝斯虫套式PCR检测方法，可以用于犬巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查；⑵本研究发现豫西地区宠物犬的巴贝斯虫感染率较低，目前发现的病原株为吉氏巴贝斯虫，媒介以镰形扇头蜱为主。