目的缺血再灌注损伤在心血管疾病中扮演着重要作用,可有效的抑制或减轻缺血再灌注损伤,对保护心功能和改善心血管疾病特别是冠心病患者的预后有重要的意义。利用大鼠H9C2心肌细胞系,模拟缺氧复氧损伤模型,从分子水平上探讨缺血再灌注损伤机制,并寻找可能有效的干预靶点,这对临床具有重要的应用价值。方法1.对H9C2心肌细胞系建立缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)模型来模拟体外心肌缺血再灌注损伤(Ischemical Reperfusion Injury,IRI),即细胞缺氧7 h后复氧3 h,将H/R处理后的H9C2心肌细胞系设为缺氧复氧组(H/R组),未处理组设为对照组(Control组),观察两组细胞形态学的变化。2.构建H9C2的H/R损伤模型,采用Real-Time PCR的方法检测mi RNA-494的含量并与Control组比较。3.利用转染技术,对H9C2细胞分别进行不处理、缺氧复氧处理、缺氧复氧+mi RNA-494 mimic对照剂处理、缺氧复氧+mi RNA-494 mimic转染四种方式,建立Control、H/R、H/R+NC、H/R+mi RNA-494四组,用CCK-8技术检测四组中的细胞存活率。4.利用Western Blot蛋白质印迹法,观察Control、H/R、H/R+NC、H/R+mi RNA-494四组H9C2细胞中Bax和Bcl-2蛋白的相对表达量。结果1.与Control组相比,H/R组的心肌细胞发生了明显的形态学改变,包括出现细胞数量减少、细胞皱缩、胞浆颗粒增加等。2.对H9C2进行H/R处理后,用Real-Time PCR检测细胞内mi RNA-494的表达量,发现H/R组中mi RNA-494表达水平明显降低(*P<0.05)。3.我们发现在Control组的细胞存活率最高,H/R组和H/R+NC组的细胞存活率最低,而H/R+mi RNA-494组的细胞存活率处在它们之间(*P<0.05)。4.通过对条带的着色深度和粗细分析发现,Control组Bax蛋白的条带最浅且最细、H/R组和H/R+NC组的条带最粗且颜色最深、H/R+mi RNA-494组中Bax蛋白的染色介于两者之间,然而Bcl-2蛋白的表达正好与Bax相反。结论在构建H9C2心肌细胞的缺氧复氧模型,即体外缺血再灌注模型时发现,mi RNA-494的表达下调、细胞存活率降低、凋亡蛋白Bax表达增加、抗凋亡蛋白Bcl-2减少,而通过增加mi RNA-494在H9C2心肌细胞中的含量可使Bax表达下调、Bcl-2表达和细胞存活率均增加,因此mi RNA-494在H9C2的缺氧复氧模型中发挥着抗心肌凋亡的作用。