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目的建立血中二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI)血红蛋白加合物的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。方法1.采集抗凝血样,按照Gries W等研究中的方法提取血红蛋白。2.分别按以下方法水解二氨基二苯基甲烷(4,4’-MDA)、N-[4-(4-氨基苄基)-苯基]乙酰胺(AcMDA)、5-异丙基-3-[4-(4-氨基苄基)苯基]乙内酰脲(ABP-Val-Hyd)血红蛋白加合物。(1)4,4’-MDA水解:准确称取20mg血红蛋白样品置于15mL离心管中,加入1mL2M盐酸溶液,在100℃条件下水解12小时;(2)AcMDA水解:准确称取20mg血红蛋白样品置于15mL离心管中,加入20μg/LAcMDA-D8内标溶液10μL,再加入1mL0.1M氢氧化钠溶液,在37℃条件下水解0.5小时;(3)ABP-Val-Hyd水解:准确称取20 mg血红蛋白样品置于15 mL离心管中,加入20μg/LABP-Val-Hyd-D8内标溶液10μL,再加入1mL2M盐酸溶液,在100℃条件水解2小时。3.水解后的样品经二氯甲烷液液萃取两次后,真空浓缩至近干,乙腈复溶后经液相色谱分离,电喷雾正离子(ESI+)模式电离、多反应监测(MRM)条件下测定。4.4,4’-MDA采用工作曲线法定量,AcMDA和ABP-Val-Hyd采用同位素内标标准曲线法定量。结果1.建立了血中MDI的3种血红蛋白加合物的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。(1)4,4’-MDA方法性能指标:4,4’-MDA的含量在0.01μg/L~25.0μg/L范围内线性良好,相关系数r=0.9998,方法检出限为0.13ng/gHb(0.656pmol/g),定量下限为0.44ng/gHb(2.219pmol/g)。加标回收率在97.0%~105.2%之间;批内精密度范围为6.1%~8.4%,批间精密度范围为6.8%~9.2%。干燥的血红蛋白样品在4~6℃的条件下,4,4’-MDA-Hb加合物可以保存1个月。(2)AcMDA方法性能指标:AcMDA的含量在0.01μg/L~25.0μg/L范围内线性良好,相关系数r=0.9996,方法检出限为0.07ng/gHb(0.291pmol/g),定量下限为0.23ng/gHb(0.957pmol/g)。加标回收率在95.3%~97.6%之间;批内精密度范围为6.2%~7.0%,批间精密度范围为7.9%~8.0%。干燥的血红蛋白样品在4~6℃的条件下,AcMDA-Hb加合物可以保存2个月。(3)ABP-Val-Hyd 方法性能指标:ABP-Val-Hyd 的含量在 0.05μg/L~20.0μg/L范围内线性良好,相关系数r=0.9995,方法检出限为0.39ng/gHb(1.205pmol/g),定量下限为1.29ng/gHb(3.989pmol/g)。加标回收率在94.9%~97.8%之间;批内精密度范围为4.6%~6.2%,批间精密度范围为4.2%~5.8%。干燥的血红蛋白样品在4~6℃的条件下,ABP-Val-Hyd-Hb加合物可以保存4个月。在选定的实验条件下,现场可能共存的干扰物以及样品中的基体成分均不影响三种血红蛋白加合物的测定。2.采用建立的方法在16名年龄大于45岁的一般人群进行应用。5份血样检出 4,4’-MDA,含量在(<0.13ng/gHb)~0.63ng/gHb 之间;其中 1 份 AcMDA 的含量为 0.09ng/gHb;16 份血样均未检出 ABP-Val-Hyd(<0.39ng/gHb)。结论该研究建立了血中MDI的3种血红蛋白加合物的超高效液相色谱-串联质谱测定方法,方法的各项技术指标均符合GBZ/T 210.5-2008《职业卫生标准制定指南第5部分:生物材料中化学物质测定方法》要求。通过人群应用表明该方法适用于一般人群血中MDI的3种血红蛋白加合物的测定。