酸碱性水梯度提取柑橘皮渣类黄酮、柠碱及初步纯化工艺研究

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黄酮类化合物与柠檬苦素类似物广泛的存在于柑橘属植物中且含量丰富。国内外大量的研究表明黄酮类化合物与柠檬苦素类似物具抗癌作用、抗氧化、抑菌、降低胆固醇、改善心脑血管循环及改善睡眠等多种生理活性。国内外对于柑橘黄酮类物质有深入系统性研究,但柠檬苦素类似物在国内的系统研究不多,已有的报道大部分是使用有机溶剂从柑橘种子中提取柠檬苦素类似物,此法原料来源有限并且不符合工业生产要求。本试验拟用代表性的榨汁品种甜橙皮渣作为原料,根据二类物质的化学性质选用酸碱性水浸提法,分别研究酸碱性水提取甜橙皮渣中的柠檬苦素类似物与黄酮类化合物工艺参数,通过单因素试验和旋转回归正交试验确定最佳的工艺参数,并采用萃取、浓缩、大孔树脂吸附分离对提取液中的黄酮类化合物与柠檬苦素类似物进行初步分离纯化并确定整体最佳工艺参数。选用酸碱性水做为提取剂,可增加浸出率、节约溶剂成本、提取设备简单、简化整体工序、并对环境污染小;采用梯度提取二种物质方式,可提高提取效率并降低能耗;直接采用现榨汁柑橘皮渣,来源丰富,符合工业化要求,试验结论如下:(1)在比较酸碱性水各自提取黄酮类化合物与柠檬苦素类似物的得率以及综合考虑其化学性质后,确定先用酸性水提取柠檬苦素类似物,过滤后碱性水再提取黄酮类化合物,最后将二次提取液合并后再进行分离纯化工艺。(2)试验用硫酸溶液调节纯水得到酸性水为提取溶剂,浸提柑橘皮渣中柠檬苦素类似物,采用高效液相色谱测定柠檬苦素含量。以热浸提时间、温度及料液比为单因素试验的基础上,利用三元二次旋转组合试验设计优化提取条件,建立三因素与柠檬苦素得率之间的数学模型。结果表明,酸性水提取柑橘皮渣中柠檬苦素的最佳工艺条件为:提取时间2.6h、温度61.2℃、料水比1:19.2(g/ml)、酸性水提取液pH值为4。在此工艺条件下,柠檬苦素的得率为0.117mg/g。(3)试验使用氢氧化钠溶液调节纯水pH值为10的碱性水为提取溶剂,以热浸提方法提取柑橘皮渣中黄酮类化合物。在单因素试验的基础上,利用三元二次旋转组合试验设计及响应面分析法,优化热浸提时间、温度及料液比,建立此三因素与黄酮类化合物得率之间的数学模型。经试验确定碱性水提取柑橘皮渣中黄酮类化合物的最佳工艺条件为:热浸提时间为2.2h、料液比为1:12(g/ml)、提取温度为64.6℃。在此最佳工艺条件下,黄酮类化合物的得率为0.115%。(4)二次提取液合并后,以萃取剂和提取液1:1(ml/ml)的比例加入萃取剂二氯甲烷,萃取30min后可萃取完全,经分液后有机相中含柠檬苦素,黄酮类化合物则在水相中,将二氯甲烷挥发完可得杂质较少的柠檬苦素类似物粗品,使用大孔树脂吸咐分离在水相中的黄酮类化合物。(5)利用大孔树脂对天然植物产物的吸附分离特性,选择了7种大孔树脂,比较其对黄酮类化合物与柠檬苦素类似物的分离效果,筛选出较优的大孔树脂并对其静态吸附性能与解析性能进行了研究。在柠檬苦素的大孔树脂纯化中试验结果表明,因大孔树脂纯化后与萃取后的纯度并无明显变化,同时会损失一部分目标物,所以大孔树脂不宜用在柠檬苦素类似物的进一步纯化工艺上;在黄酮类化合物大孔树脂纯化试验中,HPD100型大孔树脂对柑橘皮渣中黄酮类化合物有较好的吸附和解析性能,其吸附率达到了83.5%,解析率达到了92.2%;利用HPD100型大孔树脂纯化柑橘皮渣中黄酮类化合物的工艺参数为:吸附时间2 h,解析时间2 h,洗脱剂为40%的乙醇,树脂吸咐黄酮类化合物量与洗脱剂使用量比例为1:500(mg/ml)。
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