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刺参具有很强的自溶能力，在一定的外界条件刺激下，体壁会出现自降解现象，甚至粘液化，给刺参的运输、储藏与加工带来极大的不便。本课题组的前期研究表明，组织蛋白酶L样蛋白酶等内源性半胱氨酸蛋白酶可降解刺参体壁蛋白。本研究通过揭示刺参自溶过程中体壁组织蛋白酶L样蛋白酶的活力及分布变化，进一步确定刺参内源性半胱氨酸蛋白酶与刺参体壁自溶的相关性。本研究采用半制备高效液相色谱分别匹配SOURCE30Q阴离子交换柱、Superdex75凝胶过滤柱和Superdex200凝胶过滤柱，通过连续分离制备高纯度的组织蛋白酶L样蛋白酶。以刺参组织蛋白酶L样蛋白酶为抗原，免疫动物制备多克隆抗体。以此为基础，采用免疫组织化学技术结合光学显微镜，观察从新鲜到自溶不同阶段的刺参体壁中组织蛋白酶L样蛋白酶的分布变化，并研究在此过程中刺参体壁各层组织中组织蛋白酶L样蛋白酶和组织蛋白酶B样蛋白酶的酶活力变化。结果显示，采用半制备高效液相色谱匹配高分离度色谱柱可制备高纯度组织蛋白酶L样蛋白酶。运用制备的多克隆抗体对纯化的刺参组织蛋白酶L样蛋白酶进行免疫印迹分析后，得到单一的显色条带，分子量约为31kDa，说明该抗体对于刺参组织蛋白酶L样蛋白酶具有很好的特异性。免疫组化实验表明，新鲜刺参体壁中组织蛋白酶L样蛋白酶的分布具有不均一性，上皮及上皮下疏松结缔组织中组织蛋白酶L样蛋白酶的分布较密集，上皮内侧的致密结缔组织中分布比较稀疏；随着自溶的进行，组织蛋白酶L样蛋白酶的染色位点均显示出由集中变为分散的趋势。酶活性分析结果表明，刺参体壁上皮及真皮外层组织蛋白酶L样蛋白酶、组织蛋白酶B样蛋白酶活力最强，真皮内层酶活力次之，内层肌肉层酶活力最弱。受紫外线照射诱导后，刺参体壁上皮层及真皮层酶活力都显示出上升趋势，停止紫外线照射后酶活力虽有所下降，但随自溶时间的延长又显示出上升趋势，表明自溶过程中组织蛋白酶L样蛋白酶和组织蛋白酶B样蛋白酶的活性始终存在，并可能从表皮层向内部进行了扩散。本研究表明，刺参体壁组织蛋白酶L样蛋白酶、组织蛋白酶B样蛋白酶的组织分布与组织自溶程度之间具有一定的相关性，它们在自溶过程中活力稳定，并显示出在组织中扩散的趋势，进一步证明了上述酶可能参与刺参体壁自溶。