油茶茶枯中茶皂素的提取纯化及黑曲霉降解

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油茶茶枯是油茶籽榨油后副产品,茶枯中茶皂素的含量为10%-15%,茶皂素具有多种生物活性,因此,如果能对茶皂素的提取、纯化和黑曲霉降解进行更加深入的研究,则将会具有十分重要的意义。  本论文以广西当地的油茶枯饼为原材料,利用有机溶剂在恒温水浴的条件下对其进行提取,得到茶皂素粗提液。研究提取时间、3%NaOH添加量、乙醇浓度、料液比、温度和提取次数六个因素对油茶茶枯中茶皂素提取得率和含量的影响,通过正交试验,得到最适合的茶皂素提取条件为:提取时间88min,3%NaOH添加量2.5mL,乙醇浓度75%,料液比1:17,提取温度81℃,提取次数2次,最高含量为0.54mg/mL,得率为21.35%。  利用明矾絮凝除杂、H2O2脱色、大孔树脂AB-8层析等纯化茶皂素粗提液;探讨絮凝过程中明矾的最佳添加量为2.5mg,利用色阶法正交试验得到H2O2脱色的最佳条件:pH值为9,H2O2添加量为3mL,脱色时间为2h,脱色温度为60℃,再通过大孔树脂AB-8纯化得到高纯度的茶皂素,纯度达到90.53%。对纯化后的茶皂素进行相应的定性分析,向提取得到的茶皂素中加入超纯水,充分摇匀有泡沫产生,验证发泡性;将10%的α-萘酚乙醇溶液加入提取得到的茶皂素中,溶液中间产生紫色圆环;向提取得到的茶皂素中加入醋酐,溶液会变成红色,振荡后变为紫红色、紫色;薄层色谱法(TLC)对比茶皂素标准品和茶皂素样品,二者在同一位置出现斑点。  最后,通过黑曲霉降解茶皂素来观察培养基中茶皂素的降解率。降解过程采用单因素实验和正交试验设计,同时运用高效液相色谱法(HPLC)分析,优化黑曲霉液态降解茶皂素的工艺,确定最佳的降解条件:降解时间为10.5天,温度为34℃,pH为6,接种量为10%,降解率达51.02%。利用正己烷、二氯甲烷和正丁醇对黑曲霉降解茶皂素的降解液和培养基进行萃取,运用高效液相色谱法检测技术对比分析,发现正己烷和二氯甲烷分别萃取到几种未知降解产物,有待进一步分析其降解产物结构。
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