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结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTb),俗称结核杆菌,是引起结核病的病原菌[1]。其感染机制不仅与巨噬细胞存在密切关系[2-5],而且,人们开始意识到肺泡上皮细胞在结核分枝杆菌感染中起着重要的作用[6-10]。结核分枝杆菌不仅可以入侵,进入上皮细胞[11],而且可以在肺泡上皮细胞内复制[12]。肺泡II型上皮细胞是一组具有多种功能的肺泡保护性细胞[13],在天然免疫过程中发挥重要的作用[14]。最近的研究表明,肺泡II型上皮细胞具有杀菌作用[15],可将入侵的非毒性肺炎克雷伯杆菌、烟曲霉菌等迅速吞噬并杀灭。其免疫机制可能和自噬有关。本研究应用RT-PCR的方法,首先肯定了LC3在mRNA在肺泡II型上皮细胞系A549细胞中的表达。经MTB感染A549后,发现LC3表达明显下降。同时,自噬经3-MA抑制的A549细胞感染Mtb后,细胞坏死显著增加。首次证明了A549细胞感染Mtb自噬受抑,以及自噬对A549细胞的保护作用。为研究自噬体在抵抗结核分枝杆菌过程中的作用,本实验特设计了针对Atg5序列的RNAi序列,并将其导入到表达载体pSilencer? 3.1-H1 hygro,经测序鉴定,序列完全正确。然后将测序正确的质粒转染A549细胞,用Western Blot检测转染效果,结果表明有很好的基因抑制效果。后进一步用该细胞模型验证自噬体在结核分枝杆菌感染中的作用。实验结果说明,经RNAi技术干扰Atg5基因后,自噬体LC3Ⅱ的表达水平降低。而此时再用卡介苗感染A549细胞,细胞的抵抗能力明显下降。本实验说明自噬体在肺泡Ⅱ型上皮细胞抵抗结核分枝杆菌的过程中起着非常重要的作用。本研究表明,在结核分枝杆菌感染上皮细胞的过程中,自噬作用是一种保护机制。结核分枝杆菌可以通过抑制上皮细胞自噬进而削弱细胞的抵抗能力,致使其坏死增加,从而促进结核分枝杆菌的扩散。