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目的:肝癌是慢性肝病患者最常见的恶性肿瘤之一,其预后不良的主要原因是淋巴道转移和复发。肝癌细胞增殖、迁移、侵袭行为是其转移或复发的早期生物学特征。本研究目的旨在探讨肝癌细胞中JNK/p53/ANXA7信号通路的表达及其对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响;并进一步探讨JNK和ANXA7是否通过ATF2及其相关lncRNA影响肝癌的淋巴黏附能力,揭示肝癌转移早期有关生物学行为的机制,为临床治疗提供新靶点。方法:1.分别下调Hca-P细胞中JNK、p53、ANXA7的表达水平并验证下调效率:(1)利用Lipofectamine2000将化学合成的sh RNA-JNK、sh RNA-p53、sh RNA-ANXA7以及对照无关序列(control-sh RNA-treated)转染小鼠腹水型肝癌细胞Hca-P,并通过荧光倒置显微镜观察GFP表达量、qRT-PCR及Western blot验证转染效率。(2)采用G418对转染后的细胞进行28天的筛选,建立稳转细胞系。2.探讨在Hca-P细胞中JNK/p53/ANXA7信号通路的表达:分别下调JNK、p53、ANXA7及采用JNK抑制剂(JNK-inhibitor-treated),通过qRT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光检测与Hca-P组和control-sh RNA-treated组相比JNK/p53/ANXA7信号通路各基因及蛋白水平的表达情况。3.JNK/p53/ANXA7信号通路对Hca-P细胞增殖、迁移和侵袭的影响:(1)通过CCK8实验检测Hca-P、control-sh RNA-treated、sh RNA-JNK、sh RNA-p53、sh RNA-ANXA7、JNK inhibitor-treated组的细胞增殖能力。(2)通过Transwell实验检测上述6组细胞的迁移和侵袭能力。4.下调JNK、ANXA7对ATF2表达量的影响:通过qRT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光检测control-sh RNA-treated、sh RNA-JNK和sh RNA-ANXA7组中ATF2在基因和蛋白水平的表达量。5.下调JNK、ANXA7对淋巴黏附的影响:通过淋巴黏附实验检测control-sh RNA-treated、sh RNA-JNK和sh RNA-ANXA7组细胞的淋巴黏附能力。6.下调JNK、ANXA7对ATF2相关lncRNA NONMMUT114121.1表达量的影响:通过qRT-PCR检测control-sh RNA-treated、sh RNA-JNK和sh RNA-ANXA7组中lncRNA NONMMUT114121.1的表达量。结果:1.利用sh RNA在Hca-P细胞中下调ANXA7、p53、JNK的表达。通过qRT-PCR和Western blot在基因和蛋白水平验证,已成功建立下调ANXA7、p53、JNK细胞株(P<0.05)。2.肝癌细胞中JNK/p53/ANXA7信号通路表达。(1)与Hca-P组和control-sh RNA-treated组相比,下调JNK和使用JNK抑制剂后,JNK、p53、ANXA7在基因水平和蛋白水平均下降(P<0.05);下调p53后,JNK、p53、ANXA7在基因水平和蛋白水平均下降(P<0.05);下调ANXA7后,在基因和蛋白水平ANXA7的表达量均下降(P<0.05),而JNK和p53无明显变化。(2)细胞免疫荧光结果显示,与Hca-P组和control-sh RNA-treated组相比,下调JNK和使用JNK抑制剂组中JNK、p53、ANXA7荧光亮度减弱;下调p53组中JNK、p53、ANXA7荧光亮度减弱;在下调ANXA7组中ANXA7荧光亮度减弱,而JNK和p53的荧光亮度无明显变化。证明Hca-P细胞中表达JNK/p53/ANXA7信号通路。3.JNK/p53/ANXA7信号通路对Hca-P细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。(1)CCK8实验结果显示:与Hca-P组和control-sh RNA-treated组相比,下调JNK、p53、ANXA7及使用JNK抑制剂后,细胞增殖能力均下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)Transwell实验结果显示:下调JNK、p53、ANXA7及使用JNK抑制剂组的细胞培养24h后,穿膜及穿过基质胶的细胞数量少于Hca-P组和control-sh RNA-treated组,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.JNK、ANXA7对ATF2表达量的影响。(1)qRT-PCR和Western blot检测,下调JNK、ANXA7后与control-sh RNA-treated组相比ATF2在基因和蛋白水平表达量均减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)细胞免疫荧光结果显示,与control-sh RNA-treated组比,下调JNK、ANXA7的实验组ATF2荧光亮度均减弱,结果与Western blot一致。5.JNK、ANXA7对淋巴黏附的影响。下调JNK、ANXA7后与control-sh RNA-treated组相比,细胞的淋巴黏附数量减少(P<0.05)。6.JNK、ANXA7对ATF2相关lncRNA NONMMUT114121.1表达量的影响。与control-sh RNA-treated组相比,在下调JNK组里lncRNA NONMMUT114121.1表达量显著降低(P<0.01),而在下调ANXA7组里lncRNA NONMMUT114121.1表达量显著升高(P<0.01)。结论:(1)JNK/p53/ANXA7信号通路在肝癌细胞中表达;(2)抑制JNK/p53/ANXA7信号通路可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭;(3)JNK、ANXA7的下调可抑制ATF2的表达及肝癌细胞淋巴黏附能力;(4)JNK/ANXA7信号通路可能通过ATF2影响肝癌细胞生物学功能;(5)JNK的下调可抑制ATF2相关lncRNA NONMMUT114121.1表达,ANXA7的下调可促进ATF2相关lncRNA NONMMUT114121.1表达,该lncRNA可能参与肝癌转移早期生物学的发生发展。