【摘 要】
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目的:从中医理论自身发展的脉络出发,梳理古代中医学对AD的认识,探讨安神益智法防治AD的中医理论内涵。以斑马鱼为动物模型,选用安神益智法代表方生慧汤进行实验研究,从行为学、组织病理学与分子生物学等多方面探讨其防治AD的可能作用机制,以期为中医AD相关研究的深入开展和临床实践提供参考。方法:1.理论研究:查阅整理相关文献,归纳分析古代医家对于AD的理论阐述,重点梳理AD的病因病机和治疗方法,结合安神
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目的:从中医理论自身发展的脉络出发,梳理古代中医学对AD的认识,探讨安神益智法防治AD的中医理论内涵。以斑马鱼为动物模型,选用安神益智法代表方生慧汤进行实验研究,从行为学、组织病理学与分子生物学等多方面探讨其防治AD的可能作用机制,以期为中医AD相关研究的深入开展和临床实践提供参考。方法:1.理论研究:查阅整理相关文献,归纳分析古代医家对于AD的理论阐述,重点梳理AD的病因病机和治疗方法,结合安神益智法的治法和方药分析探讨安神益智法治疗AD的合理性。2.实验研究:选用8月龄的野生型AB系斑马鱼,随机分为正常组、模型组、多奈哌齐组和生慧汤组,除正常组外,其余各组用Al Cl3浸泡给药30d建立AD斑马鱼模型,造模结束后正常组和模型组给予常规养鱼水,多奈哌齐组和生慧汤组分别给予多奈哌齐药液和生慧汤药液,给药14d。应用T迷宫实验检测各组斑马鱼的学习记忆能力,评价安神益智法对AD斑马鱼模型行为学的影响。应用ELISA实验检测各组斑马鱼脑组织中APP、Aβ1-42含量,免疫组织化学染色法观察各组斑马鱼脑部Neu N和GFAP阳性细胞数量,评价安神益智法对AD斑马鱼模型病理学的影响。应用Western Blot检测各组斑马鱼脑组织中PI3K、Akt、p-Akt、m TOR的蛋白质表达水平,评价安神益智法对AD斑马鱼模型PI3K/Akt/m TOR信号通路相关基因表达的影响。结果:1.实验一结果T迷宫实验:与正常组相比,模型组斑马鱼进入EC区的潜伏时间增加（P＜0.05）,在EC区的累计停留时间减少（P＜0.05）,第4d差异最为显著（P＜0.01）。2.实验二结果T迷宫实验:与模型组相比,多奈哌齐组和生慧汤组斑马鱼进入EC区的潜伏时间均显著缩短（P＜0.01）。从探索路径来看,与正常组相比,模型组斑马鱼的在T迷宫内的探索路径杂乱无序,缺乏目的性,难以快速找到EC区;与模型组相比,多奈哌齐组和生慧汤组斑马鱼的探索路径较为简单直接,能够快速准确地进入EC区。3.实验三结果（1）ELISA检测:与正常组相比,模型组斑马鱼脑组织中APP含量升高（P＜0.05）,Aβ1-42含量显著升高（P＜0.01）。与模型组相比,多奈哌齐组和生慧汤组斑马鱼脑组织中APP含量均显著降低（P＜0.01）,Aβ1-42含量有不同程度降低（P＜0.05,P＜0.01）。（2）免疫组化染色:与正常组相比,模型组斑马鱼脑组织中Neu N和GFAP阳性细胞数显著下降（P＜0.01）,与模型组相比,多奈哌齐组和生慧汤组斑马鱼脑组织中Neu N和GFAP阳性细胞数增加（P＜0.05）,差异有统计学意义。4.实验四结果Western Blot检测:与正常组相比,模型组斑马鱼脑组织中PI3K、Akt、p-Akt和m TOR蛋白表达水平都有明显降低（P＜0.01）。与模型组相比,多奈哌齐组和生慧汤组斑马鱼脑组织中PI3K、Akt、p-Akt和m TOR蛋白表达水平有不同程度升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论:1.年老神衰,神智无主,神机失用易引发老年性痴呆,AD的发病与“神”“智”密切相关,安神益智法是防治AD的重要方法。2.采用三氯化铝溶液浸泡成年斑马鱼的造模方法建立AD斑马鱼模型具有可复制性。3.安神益智法代表方生慧汤能改善AD斑马鱼模型的学习记忆能力和认知功能障碍。4.安神益智法能减少AD斑马鱼模型脑部异常Aβ的积累,抑制Aβ的毒性损伤,促进神经元的修复和再生。5.安神益智法可能通过激活PI3K/Akt/m TOR通路影响AD的病理改变,显示出神经保护作用。
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