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鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由鸡传染性法囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性、病毒性传染病。疫苗的防制曾使该病得到很好地控制。近年来,由于IBDV变异株毒力的增强和一些强毒株、超强毒株的出现,传统的疫苗已经不能控制本病的流行,这也导致免疫IBDV疫苗的鸡群发病的情况经常发生,IBD的流行病学规律从此发生改变。 本研究针对近年来我国鸡传染性法氏囊病防制过程中出现的免疫失败现象,首先对该病的分子流行病学进行了研究。从广东省发生传染性法氏囊病的鸡场分离了8株IBDV毒株。运用RT-PCR方法对其VP2基因进行了扩增、测序、序列分析和遗传进化分析,并用绒毛尿囊膜接种方法测定了8个分离毒株的ELD50,以及对SPF鸡的致死率。结果表明:在遗传进化树中,这8个分离毒株与超强毒参考毒株共同形成一个大分支。8株分离毒的ELD50测定结果呈现一定的差异,对SPF鸡的致死率均在60.0%以上。以上试验结果显示这8个毒株均属于IBDV超强毒,同时也说明当前在广东省引起鸡传染性法氏囊病的主要毒株类型为vvIBDV。 本研究运用RT-PCR方法扩增IBDV JM-1/10株VP2基因,并将扩增产物克隆到质粒 pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-VP2;设计引物扩增重组质粒pcDNA3.1-VP2的CMV-VP2基因片段,亚克隆到杆状病毒双表达载体pFastBac-Dual-VSVG。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统和脂质体法转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒Ac-V-VP2。通过IFA试验表明重组杆状病毒(Ac-V-VP2)能够有效转导哺乳动物细胞;经Western blotting分析,外源蛋白能够在哺乳动物细胞内得以表达。综合以上试验结果表明,本试验成功获得重组杆状病毒Ac-V-VP2。 将重组杆状病毒Ac-V-VP2以1010 pfu/mL的剂量免疫14日龄SPF鸡,检测该重组杆状病毒的免疫效果,试验结果表明:在14日龄首次免疫后第一周,重组杆状病毒免疫组(Ac-V-VP2)可检测到较高的ELISA特异性抗体,第二次免疫之后,重组杆状病毒免疫组(Ac-V-VP2)特异性抗体水平持续升高,均极显著地高于杆状病毒野毒对照组(Ac-V-EGFP)及PBS对照组(P<0.01)。第二次免疫一周后,用IBDV超强毒株(JM-1/10)进行相应的攻毒保护试验。未免疫攻毒组鸡法氏囊有明显黏膜出血、肿胀病变,而免疫组鸡法氏囊病变不明显。重组杆状病毒免疫组(Ac-V-VP2)保护率为50%(6/12),明显地高于杆状病毒野毒对照组(Ac-V-EGFP)及PBS对照组。以上结果证明本研究所制备的重组杆状病毒可诱导机体产生特异性抗体,对机体有一定的保护作用。