几种林木病原菌拮抗放线菌的筛选及其活性物质研究

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本文对采自秦岭火地塘林区的10个土样进行了放线菌的分离,共得到了512株菌株,经过初步分类合并,采用其中的292株进行了对几种常见林木病原菌的拮抗试验,结合发酵液的活性测定和生测治试验得到了一株抑菌谱较广、活性极强的放线菌——268号菌株,并对其做了一系列的研究。主要研究结果如下:1.以髙氏一号琼脂、天门冬素淀粉琼脂和精氨酸琼脂培养基做为分离培养基,重铬酸钾浓度为150 mg/L,可以较好的分离该土样中的放线菌。2.各土样的各层链霉菌属均为绝对优势属,其它属分离出的较少,粉红孢类群、金色类群和灰褐类群是大多土样的优势类群。3.平板初筛结果表明:14、42、45、50、162、189、268及289号菌对多种靶菌均具有较强的拮抗作用。发酵液的活性测定表明:42、189和268号菌株对多种靶菌存在较强的抑制性。预防效果的生物测定结果表明:268号菌株的效果最好,预防效果为64.7%。4.对268号菌株的发酵液进行了萃取试验,其乙酸乙酯相具有强烈的抑菌活性。乙酸乙酯相的薄层层析试验表明:以体积比10:7的石油醚和丙酮为展开剂可以较好地将活性组分与其他组分分离开。并对268号菌株活性产物的性质进行了初步研究,结果表明:该物质没有挥发性,对酸有着较好的稳定性,对强碱不稳定,对热和紫外线较为稳定。5.通过单因素试验结合正交试验,对268号菌株的发酵培养基和发酵条件进行了优化,结果表明:最适的发酵培养基配方为:黄豆饼粉10 g/L,蛋白胨3 g/L,葡萄糖10 g/L,NaCl 2.5 g/L,FeSO4 0.01 g/L,pH≈8.0,最适的发酵条件为:菌龄48 h,接种量2%,装液量200 ml,发酵时间6 d,摇床转速150 dr/min。6.对268号菌株活性产物的抑菌机制进行了初步研究,结果表明:其抑菌活性主要体现在对菌丝的影响上,对杨树溃疡病、苹果腐烂病和杨树腐烂病病原菌的生长抑制作用最强,EC50分别为0.0076 ml/ml、0.0061 ml/ml和0.0043 ml/ml,对镰刀菌和胶孢炭疽菌的EC50分别为0.0531 ml/ml和0.0497 ml/ml。7.采用经典的鉴定方法,初步将268号菌株定为灰产色链霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一个变种。
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