【摘 要】
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目的:研究β-蜕皮甾酮对MC3T3-E1细胞增殖、分化的影响以及潜在的分子机制,为β-蜕皮甾酮运用于骨质疏松症的治疗提供理论依据。方法:通过观察MC3T3-E1细胞的一般状况及形态特征,以及进行茜素红S染色,鉴定MC3T3-E1细胞的成骨矿化潜能。CCK-8法检测各药物浓度（0,0.01,0.1,1,10μmol/L）β-蜕皮甾酮对MC3T3-E1细胞增殖活性的影响。使用碱性磷酸酶检测试剂盒对碱性
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目的:研究β-蜕皮甾酮对MC3T3-E1细胞增殖、分化的影响以及潜在的分子机制,为β-蜕皮甾酮运用于骨质疏松症的治疗提供理论依据。方法:通过观察MC3T3-E1细胞的一般状况及形态特征,以及进行茜素红S染色,鉴定MC3T3-E1细胞的成骨矿化潜能。CCK-8法检测各药物浓度（0,0.01,0.1,1,10μmol/L）β-蜕皮甾酮对MC3T3-E1细胞增殖活性的影响。使用碱性磷酸酶检测试剂盒对碱性磷酸酶活性进行测定。使用Real-Time qPCR检测成骨相关标志物在基因表达水平上的变化。使用Western Blot检测成骨相关标志物及Wnt/β-catenin信号通路相关因子在蛋白表达水平上的变化。使用DKK1预处理MC3T3-E1细胞后,进行茜素红S染色,Western Blot检测成骨相关标志物及Wnt/β-catenin信号通路相关因子在蛋白表达水平上的变化。结果:通过观察细胞的一般状况及形态特征,以及茜素红S染色,鉴定了 MC3T3-E1细胞的成骨矿化潜能。CCK-8法实验显示各药物浓度β-蜕皮甾酮具有促进MC3T3-E1细胞增殖的作用（P＜0.05）;碱性磷酸酶的检测也提示其具有提高酶活性的作用（P＜0.05）。各药物浓度的β-蜕皮甾酮上调了 MC3T3-E1 细胞 ALP、COL Ⅰ、OCN、Runx2 的 mRNA相对表达水平（P＜0.05）,而0.1μmol/Lβ-蜕皮甾酮组与1μmol/L组相比,对OCN的mRNA相对表达水平无显著性差异（P＞0.05）。各药物浓度的β-蜕皮甾酮上调了 MC3T3-E1 细胞 ALP、COL Ⅰ、OCN、Wnt3a 及 β-catenin的蛋白表达水平（P＜0.05）;0.1μmol/L、1μmol/L 和 10μmol/L 三组之间相比,对OCN的蛋白表达水平均无显著性差异（P＞0.05）;0.01μmol/L组与10μmol/L组相比,对Wnt3a蛋白相对表达水平无显著性差异（P＞0.05）;0.1μmol/L组与10μmol/L组相比,对β-catenin蛋白相对表达水平无显著性差异（P＞0.05）。相同时间点经DKK1预处理组MC3T3-E1细胞矿化的钙结节数量减少;经过DKK1预处理组的MC3T3-E1细胞β-catenin蛋白相对表达水平下调（P＜0.05）,而Wnt3a蛋白相对表达水平无显著差异（P＞0.05）;同时ALP、COLⅠ、OCN蛋白相对表达水平均不同程度的下调（P＜0.05）。结论:1.MC3T3-E1细胞具有成骨分化的潜能。2.β-蜕皮甾酮促进了MC3T3-E1细胞增殖、分化。3.经典Wnt/β-catenin信号通路参与了 β-蜕皮甾酮促进MC3T3-E1细胞增殖、分化的过程。4.β-蜕皮甾酮可以作为骨质疏松症治疗的一种潜在药物。
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