论文部分内容阅读
抗癌药物紫杉醇已在临床上广泛应用,但受原料红豆杉树木短缺的制约,存在巨大的供需差距,而内生真菌发酵生产紫杉醇是解决紫杉醇药源问题的很有前景的途径之一。本研究以紫杉醇产生菌HDFS4-26为材料,在其紫杉醇合成期,用TRIzolReagent提取的总RNA,构建cDNA文库,提取初级cDNA文库混合质粒。并根据GenBank中已经提交的20种红豆杉细胞中紫杉醇生物合成途径上的关键酶基因的序列,分析并选择合适的区域,合成biotin标记的探针,应用Dynal磁珠构建固定化亲和体系;然后与初级cDNA文库混合质粒进行杂交,洗脱得到筛选后的文库质粒,电转化DH10B得到筛选文库,针对筛选文库进行了580个单克隆单向测序,并进行了 EST数据分析。本试验研究为从基因组水平研究产紫杉醇内生真菌提供了重要的信息;同时也为研究内生真菌紫杉醇生物合成中相关基因及其功能分析奠定了坚实的基础,为构建高产紫杉醇基因工程菌株奠定了基础。本试验研究结果如下:1.紫杉醇产生菌HDFS426在S-7发酵培养基中发酵培养,发酵培养至第9d其发酵液经薄层层析结果显示紫杉醇量达到高峰。2.构建的初级cDNA文库库容量为2.3×l07,重组率达95%,平均插入片段长度大于1 kb,随机挑取32个克隆正反向测序,共28个克隆得到有效测序,其中22个克隆测通（平均序列长度1260bp）,将这22个克隆的插入序列输入NCBI网站进行Blast分析和通过ORF预测蛋白全长,22个克隆预测蛋白全长均大于100aa,其中5个克隆长度大于300aa,14个克隆长度介于200～300aa,据此判断所构建文库全长比例大于50%,达到覆盖遗传信息的标准。3.筛选后的文库库容量为1.75×106,重组率达94%,平均插入片段长度大于1kb。4.以筛选后的文库为基础随机选取580个克隆进行5’端测序,去除低质量序列和小于100bp的序列后,经过软件拼接,共得到533条unigene,包含39条序列重叠群和494条单拷贝EST,序列的平均长度为807bp。5.利用BLASTX和NCBI非冗余蛋白库比对,533条unigene与现有数据库中的序列存在明显的相似性且具有功能的（E
其他文献
在科技迅速发展、信息化技术加快的今天,智能卡已成为生活中一件不可或缺的东西。手机卡、公交卡、银行卡、社保卡等等已随处可见,目前,公民二代身份证与银行卡IC化需求更是
量子密钥分配(QKD)协议能够为远程合法通信双方提供密钥协商,结合“一次一密”密码系统,理想条件下可以实现无条件安全的保密通信。实际QKD系统是理想QKD协议的具体物理实现,
随着半导体工艺水平的不断进步,集成规模与电路速度也翻倍增长,因此带来了一系列电互连问题,光互连技术解决方案应运而生。通过改性技术（如应力、合金化等作用）,Ge可由间接带隙
随着职业教育迅速发展,国家对职业学校的重视程度不断提升。而互联网社会的发展速度加快,国家对计算机专业的课程要求也不断提高,目前中职学校计算机专业的教学不能满足企业相关岗位的要求。在此基础上,我们需重点关注计算机专业中职学生,尝试进行专业课程改革。伴随着全球网络普及化,五彩缤纷的网页争相进入大众的视野,用户对网页审美也有了更高的要求。这突出了网页设计与制作课程的重要性。网页设计与制作课程设置在计算机
本文对监督过失犯罪的认定问题进行研究,一共分为五个部分:引言、正文的三部分内容、结论。正文的第一部分对监督过失犯罪的产生背景、监督过失的概念、监督过失的特征进行了介绍。同时,通过对监督过失犯罪的三种研究立场:旧过失论与修正的旧过失论、危惧感说(超新过失论)、新过失论的观点进行梳理和分析,得出以下结论:第一,传统的旧过失论、修正的旧过失论、危惧感说在监督过失犯罪的认定的过程中都存在着明显弊端。第二,
随着高速列车速度的提高,车辆与轨道间的作用力影响整车平稳性,安全性及舒适性,高速运行也会导致车辆和轨道损伤加剧,使得车辆存在结构失效的风险。作为高速列车的关键部件,转向架保证了列车在较高运行速度下的安全性和平稳性,从而决定了列车的运行性能。转向架构架多釆用焊接结构,而列车高速运行时转向架受到各种复杂载荷的作用,容易产生结构失效。因此,探索转向架结构材料的焊接性能对保证转向架质量起着至关重要的作用。
信息化时代的到来,互联网、大数据催生着社会方方面面数字化的革新,人们的思维理念、行为方式、生活习惯更加多样,文化传播形式内容和受众的选择更加多元,各种思想文化互动交融多变和复杂交织的态势更加凸显。这些都影响着公共文化建设环境,改变着公共文化服务供给和需求的内容、方式。因此人们对于公共文化提出了更高的要求,需求也变得更具多样性和参与性。而博物馆作为提供公共文化产品和服务的载体,提供高品质的公共文化服
随着社交网络的发展与普及,信息分享意愿一直是营销学界关注的热点。以往对信息分享意愿前因的研究多从信息发布者的心理动机出发,较少探究动机的前因。本研究重点从居住流动
冷作变形模具是一种重要的工具。它在汽车制造,航空航天,大型机械制造领域有着举足轻重的地位。冷作变形模具包括拉伸模,冲裁模,冷镦模,弯曲模。通过不同的产品工艺流程,模具