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该研究旨在系统研究生后不同发育阶段的啮齿类动物睾丸和附睾GCNF表达的时空规律及其雄激素调控,为进一步研究GCNF与精子发生和精子成熟的关系提供研究基础.该研究分两个部分:第一部分:生殖细胞核因子(GCNF)在睾丸和附睾生后发育中的表达;目的和方法:采用半定量RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR以及间接免疫荧光等方法,从mRNA和蛋白水平分别检测GCNF基因在小鼠、大鼠睾丸和附睾中的表达及其生后发育中的变化规律.鉴于GCNF在啮齿类动物睾丸与附睾的生后发育过程中有规律的时空表达方式提示GCNF可能在精子发生的启动、精子核蛋白转型、精子成熟以及附睾上皮的发育和分化中起重要作用.第二部分:雄激素对生殖细胞核因子(GCNF)在附睾上皮中表达的调控;目的和方法:①建立一个简便而有效的大、小鼠附睾上皮体外培养系统.②采用RT-PCR及间接免疫荧光等方法,从mRNA和蛋白水平分别检测GCNF基因在小鼠、大鼠培养附睾上皮中的表达及其雄激素调控.③通过去势手术以及去势后补充雄激素等手段,进一步研究在体情况下雄激素对附睾上皮GCNF表达的调控以及雄激素调控的区域性.结论:GCNF蛋白和mRNA在附睾头部、体部、尾部原代培养上皮中均有表达且表达较稳定,其表达有明显区域性.雄激素对体外和体内附睾上皮GCNF蛋白和mRNA的表达均有下调作用,且雄激素的调控作用有明显的区域特异性.总之,该研究是对啮齿类动物睾丸与附睾生后发育过程中GCNF表达时空规律的系统观察,主要的创新点有:(1)首次观察到GCNF在小鼠睾丸生后发育的第17天其细胞定位发生了关键性的转变,即从原先定位于精原细胞和早期精母细胞转而定位于圆形精子细胞和部分粗线期精母细胞,提示GCNF在精子发生的启动中可能起到一个"开关"样作用.(2)首次系统观察了啮齿类动物附睾生后发育中GCNF表达的时空规律以及区域特异性,提示GCNF可能在附睾上皮的发育分化和附睾精子成熟中起重要作用.(3)用在体和离体两种实验方法进一步证实雄激素对附睾上皮GCNF蛋白和mRNA的表达均有下调作用,且雄激素的调控作用有明显的区域性.