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植物的受体样蛋白激酶(Receptor-like Kinase)是一类具有多个成员的膜蛋白家族。RLK在信号传递过程中利用特异的胞外段识别多种胞外病原效应物分子、糖类或者激素多肽等一系列的小分子化合物,然后通过胞内激酶区域的磷酸激酶活性将信号传递到一系列下游途径,最终控制植物的生长发育和抵抗病原微生物的防御反应。在水稻和拟南芥中,已经有多个参与植物抗病和调控生长发育的RLK成员被报道,而且在重要的单子叶粮食作物中,如:水稻、大麦和小麦,多个参与防御病原微生物的基因属于典型的RLK成员。近年来对小麦和水稻中RLK基因成员的研究已经成为分子育种专家所关注的热点,而本论文的研究主要针对小麦条锈病抗性基因的一个成员TaRLK-R3展开,主要包括TaRLK-R3蛋白表达及其同源基因的拷贝数分析。
由于TaRLK基因在小麦中是一个多拷贝基因家族,对目前已经分离到的TaRLK基因家族成员的基因结构进行分析表明,小麦中TaRLK基因家族成员都是由3个外显子和2个内含子组成。我们利用内含子多念性对二倍体、四倍体和六倍体小麦中TaRLK的同源基因拷贝数进行了研究,发现二倍体D组中有两个TaRLK的同源基因,在四倍体小麦中至少有7个TaRLK的同源基因,而六倍体小麦中至少有11个TaRLK成员。利用获得的TaRLK的拷贝数信息,我们从二倍体D组材料As91中分离到了两个TaRLK成员的cDNA序列。
为了将来在蛋白水平上研究TaRLK-R3在小麦抗病反应过程中的功能,以及它可能参与的与其它蛋白元件的相互作用,利用pET30a原核表达系统表达并纯化了TaRLK-R3胞外域的一个多肽片段,并制备了多克隆抗体。