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目的:研究载RANKL的磷酸钙骨水泥/聚乳酸-羟基乙酸微球复合物在体内促进破骨细胞样细胞生成的作用,为促进磷酸钙材料降解提出新思路,为该类生物材料发展新的策略提供科学依据。方法:本实验由两个部分组成:1.载RANKL的CPC/PLGA微球复合物的制备及RANKL的体外检测W/O/W复乳法制备PLGA微球,扫描电镜观察。将5ml含A组)0.5ug/ml、B组)1.0 ug/ml、C组)1.5 ug/ml的RANKL溶液分别与0.2g PLGA微球混合,冷冻干燥。0.8g CPC分别与0.2g A、B、C组PLGA微球加0.35ml固化液调拌,制成直径6mm、高2mm的试样。将预固化24h的A、B、C组试样浸渍于1.5ml PBS溶液,37℃孵育。于1h、7天、14天、21天、28天、35天和42天采液,ELISA法检测RANKL释放量。收集余液,根据RANKL的释放结果,配成50ml含100ng/ml RANKL+10%胎牛血清+DMEM培养液,培养RAW264.7细胞至第8天,抗酒石酸酸性磷酸酶染色。2.载RANKL的CPC/PLGA微球复合物的皮下植入设A组(含0.5ug/ml RANKL的CPC/PLGA)、B组(含1.0ug/ml RANKL的CPC/PLGA)、C组(含1.5ug/ml RANKL的CPC/PLGA)D组(不含RANKL的CPC/PLGA对照组)(n=4)。建立SD大鼠背部皮下植入模型,每只大鼠背部植入4个试样。观察4、8、12周,取材,脱钙,HE染色和免疫组织化学染色观察材料周围软组织的形态变化、破骨细胞样细胞(Osteoclast-like cell,OLC)的生成情况和RANKL的阳性表达情况。结果:1.w/o/w复乳法制备的plga微球呈球状或椭球状,表面圆整,其平均粒径为19±8um。2.rankl体外释放结果显示:a、b、c组在前7天释放较快,随后进入缓释阶段。各组在1h时均可检测到rankl,7天时检测到释放高峰,35天各组仍能检测到少量rankl,42天时检测不到rankl。各组前7天rankl释放量占总释放量的百分比为a组62.7%,b组62.5%,c组52.4%,组间无显著差异(p>0.05)。28天,各组rankl释放量占总释放量的百分比为a组98.1%,b组97.2%,c组96.1%,组间无显著差异。a、b、c组rankl总释放量占所投入的rankl量百分比分别为31.0%、17.6%、14.7%,a组与b组、a组与c组比较均有显著性差异(p<0.05),b、c两组间无统计学差异。3.抗酒石酸酸性磷酶染色结果显示:培养raw264.7细胞至第8天时,cpc/plga/rankl浸提液组可见trap(+)的olc。该类细胞体积较大,形态不规则,细胞胞质内有红色或深红色染色颗粒,细胞密度较稀疏。对照组无trap(+)的olc。4.he染色结果显示:第4周,材料周围软组织可见少量散在的淋巴细胞和浆细胞,毛细血管和成纤维细胞增生,形成纤维囊包裹材料,纤维囊腔侧可见olcs。在olc计数和胞核计数、炎性细胞反应和纤维囊分级方面,各组间无统计学差异(p>0.05)。第8周,各组olc细胞数及胞核数较第4周均增多(p<0.05),各组细胞数比较无统计学差异。a组与d组间胞核数比较具有统计学差异。在炎性细胞反应和纤维囊分级方面,各组间无统计学差异。第12周,a、b、c、d组间细胞数比较无统计学差异,与第8周比较无统计学差异。胞核计数,a、d两组间以及b、d两组间比较具有统计学差异,a组第12周较第4、8周增多。在炎性细胞反应和纤维囊分级方面,各组间无统计学差异。5.免疫组化染色结果显示:4周时,A、B、C组RANKL阳性表达较对照组强,A组与B、C、D各组间差异无统计学意义(P>0.05),B组和D组,C组和D组间差异具有统计学意义(P<0.05);第8周,A、B、C组RANKL阳性表达较对照组强,且比第4周强,A组与B、C、D各组间差异均无统计学意义,B组和D组,C组和D组间差异具有统计学意义;第12周,A、B、C组的RANKL阳性表达较第8周减弱,但各组间差异均无统计学差异。结论:载RANKL的CPC/PLGA微球复合物具有良好的组织相容性,可诱导破骨细胞样细胞的生成及增强其活性,并能增强周围组织RANKL的表达。