结核病是由结核杆菌引起的一种传染病,结核杆菌由于其独特的致病和流行传播方式,加之近年来多耐药性结核杆菌的产生以及结核杆菌与人类免疫缺陷症病毒(HIV)的交叉伴发感染等原因使结核病的流行再度呈现上升趋势,全球结核病的防治工作形势严峻.目前世界上许多国家都加大了对结核病的防治力度,严格执行直接面视下的短程化学疗法(简称DOTS),同时也积极开展结核病的基础和临床科研工作,探索预防和治疗结核病的新方法,以便更有效地控制结核病.自1921年以来,BCG就一直广泛应用于结核病的预防接种,目前在全球已接种超过了30亿人次,大量研究表明BCG对儿童原发型结核病具有较好的预防作用,但对作为结核病主要流行和传播形式的成人结核病,BCG预防效果较差.由于目前对结核杆菌毒力基因了解仍旧有限,距离安全阐明结核杆菌毒力基因,尤其是与其侵袭力、生活力及抗药性产生密切相关的一些重要基因的功能还有相当的距离.Rv0901基因编码的蛋白是尚未确定其生物特征和功能的假想蛋白,属于结核杆菌特异性蛋白成分,位于结核杆菌胞膜表现,呈表面暴露或属分泌蛋白物质.其疏水性N末端与麻风杆菌毒素蛋白TR03307相似,我们推想它可能是结核杆菌毒力相关基因.为验证这一推想,该研究采用基因打靶技术构建了结核杆菌Rv0901基因缺失株以用于进一步通过动物实验研究其毒力和功能.首先构建用于基因打靶的特异性传递载体,该载体包含用于同源重组的缺失靶基因序列和筛选标记,然后用电穿孔法将自杀质粒pRKS10转入结核杆菌标准毒力株H37Rv中,筛选获得结核杆菌Rv0901基因缺失株,并进行鉴定.该研究首次成功构建了结核分支杆菌Rv0901基因缺失株,为随后将进行的Rv0901基因毒力及基因功能的研究奠定了基础.