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目的：构建慢病毒IL-15基因表达载体,包装IL-15基因表达慢病毒,体外感染肿瘤细胞,使之能够高效地表达IL-15,达到增强免疫效应的目的。方法：(1)构建慢病毒IL-15基因表达载体：首先进行质粒双酶切,将GFP编码序列从慢病毒质粒CS-CDF-EG-PRE(LO)上撤除,然后利用PCR技术,以质粒pHi2-spIL15-CMV-TAT (L3)为模板扩增IL-2SP-IL-15的编码基因,将其定向克隆于质粒CS-CDF-EG-PRE(L0)中,构建质粒CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE (LT15)。(2)以含GFP表达质粒CS-CDF-EG-PRE(L0)为对照质粒,CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE(LT15)为表达质粒,利用脂质体介导的方法分别转染293细胞、SW480细胞和MCF-7细胞。(3)以CS-CDF-EG-PRE(L0)为对照质粒,CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE(LT15)为表达质粒,与其他三种辅助质粒pMDL/pRRE (L7)、pRSV-Rev(L8)、pMD.G(L9)共转染293T细胞,包装含GFP、IL-15基因的两种慢病毒载体,分别感染Hela细胞。(4)利用倒置荧光显微镜观察细胞转染后绿色荧光的表达,流式细胞术(FCM)分析检测细胞的转染效率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞转染后24及48小时上清液中工L-15的浓度,分析IL-15基因的表达情况。结果：(1)质粒pHi2-spIL15-CMV-TAT (L3)、CS-CDF-EG-PRE(L0) CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE (LT15)经限制性(单、双)酶切,PCR检测及测序分析,证实IL-15表达质粒构建成功。(2)质粒CS-CDF-EG-PRE(L0)和CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE (LT15)利用脂质体介导的方法均可转染293T细胞、SW480细胞和MCF-7细胞,转染效率为35.3%。(3)以CS-CDF-EG-PRE(L0)为对照质粒,CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE (LT15)为表达质粒粒,与其他三种辅助质粒pMDL/pRRE(L7)、pRSV-Rev(L8)、pMD. G(L9)共转染293T细胞,成功包装了含GFP、IL-15基因的两种慢病毒,并分别感染Hela细胞,验证了慢病毒载体的活性。(4) ELISA检测结果：PBS转染组及质粒CS-CDF-EG-PRE(L0)和GFP慢病毒转染肿瘤细胞后,均无IL-15的表达；质粒CS-CDF-EF-1-spIL15-PRE (LT15)转染293细胞、SW480细胞和MCF-7细胞后,24和48小时后上清液中IL-15的表达水平有显著性差异(P<0.01)。293T细胞表达IL-15的量是SW480细胞和MCF-7细胞表达量的1.6/1.5倍(24h/48h)和1.8/1.6倍(24h/48h),SW480细胞是MCF-7细胞的1.2/1.1倍(24h/48h)；IL-15慢病毒感染Hela细胞后,IL-15能够高效地表达,不同剂量的慢病毒转染细胞的效率不同。结论：成功构建了慢病毒IL-15基因表达载体,运用脂质体介导的转染方法,将工L-15表达基因有效的导入肿瘤细胞,不同肿瘤细胞系的转基因表达有差异性。成功制备了具有感染性的慢病毒,慢病毒感染肿瘤细胞后,IL-15能够高效地表达,为体外转染T细胞等原代细胞奠定了基础。