目的:牙龈厚度对于维持牙周组织健康非常重要,临床上采用多种方法增厚牙龈。课题组前期研究提示浓缩型生长因子（concentrated growth factor,CGF）可以增加牙龈的厚度,但其潜在机制不清。本研究旨在探究CGF促进牙龈组织再生的临床应用和内在机制。材料与方法:临床研究:将符合纳入标准的20名患者随机分为Bio-gide膜组和CGF膜组,择期行牙周加速成骨正畸术（periodontally accelerated osteogenic orthodontic,PAOO）,术前和术后6个月应用锥形束CT（cone beam computed temography,CBCT）测量釉牙骨质界水平牙龈厚度,对比研究两组患者术前术后牙龈厚度的变化。基础研究:通过细胞免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色、茜素红染色、油红O染色检测牙龈间充质干细胞（gingival mesenchymal stem cells,GMSCs）的自我更新和多向分化能力。不同浓度CGF处理后,通过死活细胞染色和CCK8法检测GMSCs的生存和增殖能力;通过Transwell检测GMSCs迁移能力;通过RT-PCR,Western Blot和细胞免疫荧光观察GMSCs体外成纤维和成血管基因和蛋白表达;通过Western Blot检测AKT、Wnt和YAP信号通路的变化情况;通过免疫荧光观察YAP胞质胞核转运情况;分别利用AKT通路抑制剂LY294002和YAP抑制剂CA3研究AKT、Wnt和YAP信号通路的变化以及抑制剂作用下CGF对GMSCs迁移,成纤维和成血管能力的影响;通过过表达和敲减YAP,研究YAP与GMSCs增殖、迁移及成纤维和成血管基因和蛋白表达的关系;构建大鼠牙龈局部注射模型,分别在大鼠牙龈两侧注射CGF和PBS,通过HE染色和免疫组化染色观察大鼠牙龈厚度的变化,并研究增殖和血管化相关蛋白的表达,分析YAP表达的变化。结果:与Bio-gide膜相比,CGF可以增加PAOO患者术后牙龈厚度。经贴壁培养的GMSCs来源于间充质,展现出良好的扩增能力,并具有较强的成骨、成脂和成软骨三向分化能力。CGF对GMSCs无毒副作用,且细胞的增殖和迁移能力随CGF浓度的增加而提高。在CGF的刺激下,Ⅰ型胶原（collagen-1,Col-1）,纤维连接蛋白（fibronectin,FN）,血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和血管生成素Ⅰ（angiopoietin-1,Ang-1）的基因和蛋白表达上调。在CGF的作用下,AKT和GSK3β的磷酸化表达提高,YAP由胞质转入胞核,出现去磷酸化的现象。LY294002可以抑制AKT和GSK3β的磷酸化和YAP的去磷酸化,而CA3只能使YAP去磷酸化,对AKT和GSK3β的磷酸化水平无明显作用。进一步实验表明LY294002或CA3作用下GMSCs的Col-1,FN,VEGF和Ang-1基因和蛋白的表达降低。同样,LY294002或CA3处理后的GMSCs迁移能力也明显减弱。转染YAP过表达质粒和si RNA发现,GMSCs的增殖、迁移和Col-1,FN,VEGF和Ang-1基因和蛋白表达随YAP的变化而变化。成功构建大鼠牙龈局部注射CGF模型,与PBS组相比,CGF可以增加大鼠牙龈厚度,并提高增殖指标Ki67和血管化指标CD31的表达,YAP的核内表达也有所升高。结论:1、CGF用于PAOO术可以在一定程度上增加牙龈的厚度;2、CGF对GMSCs的增殖、迁移、成血管和成纤维再生具有促进作用;3、CGF通过AKT、Wnt/β-catenin和YAP信号通路促进牙龈再生,AKT信号通路可能是Wnt/β-catenin和YAP的潜在上游信号通路;4、YAP的去磷酸化和核转运可能是CGF促进牙龈再生的关键因素。