人脂肪源间充质干细胞对顺铂致小鼠急性肾损伤的影响

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目的人脂肪源间充质干细胞(adipose-derived stem cells,hADSCs)是来自脂肪组织中的一种多能间充质干细胞,除了具有间充质干细胞的特点外,人ADSCs还有免疫原性较低、体外稳定增值、不易衰亡、取材方便等优势。本实验建立在顺铂致小鼠急性肾损伤(Acute Kjdney Injury,AKI)模型上,将hADSCs通过尾静脉移植入小鼠体内,观察其对小鼠AKI的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将24只小鼠随机分为三组,每组8只:分别为正常对照组(A组)生理盐水组(B组)、人ADSCs组(C组)。体外培养扩增人ADSC细胞,用荧光染料标记。A组小鼠不做处理,B、C组小鼠先给予单次腹腔注射顺铂溶液12.0mg/kg,24小时后AKI制备完成。B组小鼠尾静脉注射0.2ml无菌生理盐水,C组尾静脉注射0.2ml人ADSCs细胞悬液。检测以下指标:①自动生化仪检测血肌酐、尿素氮水平;②光镜下观察肾组织病理改变;③TUNEL法标记肾小管上皮细胞的凋亡;④免疫组化法检测肾小管细胞PCAN表达;⑤ELISA法检测肾组织中TNF-1a、LI-6含量;⑥免疫荧光显微镜下观察肾组织上DAPI标记细胞。结果1.A组小鼠血清肌酐为(43.68±3.6)μmol/L;B、C组血清肌酐分别为(120.77±15.31)μmol/L、(87.24±11.07)μmol/L,与A组相比,具有差异具有统计学意义(P<0.05);B、C相比较,C组较B组降低明显(P<0.05)A组小鼠血清尿素氮为(14.74±2.24)mmol/L:B、C组血清尿素氮分别为(30.55±3.7)mmol/L.(22.65±1.11)mmol/L,与A组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);B、C相比较,C组较B组降低明显(P<0.05)2.肾近端小管上皮细胞坏死明显,根据肾小管坏死程度,采用半定量病理评估法评分,评分越高说明肾小管坏死越严重。A组评分为0,B、C组评分分别为(3.13±0.23)、(2.0±0.27);B、C组较A组明显偏高,差异具有统计学意义(P<0.05),B、C相比较,差异有统计学意义(P<0.05)3.A组凋亡细胞数为(3.88±0.44)个;B、C组凋亡细胞数目分别为(24.75±3.00)个、(18.00±2.07)个,与A组比较明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);B、C相比较,B组较C组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。4.A组为阴性对照组;B、C组阳性数目分别为(15.63±2.71)个、(24.50±2.28)个,与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05),B组较C组明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)5.A组TNF-a含量为(101.65±8.52)pg/ml;B、C组含量分别为(203.62±25.37)pg/ml、(151.82±10.89)pg/ml,与A组相比较,差异有统计学意义(P<0.05);B、C相比较,B组较C组明显升高,差异有统计学差异(P<0.05)。A组IL-6含量为(73.39±5.32)pg/ml;B、C组含量分别为(156.57±8.69)pg/ml、(129.80±4.68) pg/ml,与A组相比,差异有统计学意义(P<0.05)B、C相比较,B组较C组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)6.免疫荧光染料下观察肾组织冰冻切片,少量切片上仅见数个少量蓝色荧光发光细胞。结论1.人ADSCs对顺铂致小鼠急性肾损伤具有促修复的作用;2.人ADSCs可能是通过减少炎症因子TNF-1a和IL-6的合成或释放、肾小管细胞的凋亡及促进损伤的肾小管细胞增殖起到促进肾功能修复的作用。
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