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β-肌动蛋白是肌动蛋白家族的一员,广泛表达于真核生物非肌细胞中,是构成细胞骨架和肌小节的主要成分。它具有重要的生理功能,几乎参与了真核细胞的所有生理过程,如细胞结构的维持、细胞内运动、细胞分裂等。作为一种细胞质肌动蛋白,β-肌动蛋白在所有组织中相对持续稳定表达,因此β-肌动蛋白基因常用作定量或半定量研究的对照基因。由管家基因的身份所决定,β-肌动蛋白基因的启动子为强启动子,对于提高转基因表达量具有显著效果,且其表达不受组织的限制,这两大优点使得β-肌动蛋白基因启动子在转基因动物的研究中发挥着重要的作用。鳜鱼(Siniperca chuatsi)是我国特有的淡水鱼珍品,经济价值极高;鳙鱼(Aristichthys nobilis)、胡子鲶(Clarias fuscus)、鲮鱼(Cirrhinus molitorella)和斑鳢(Channa maculata)也是常见的淡水经济鱼类。本研究采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列和鳙鱼、胡子鲶、鲮鱼、斑鳢β-肌动蛋白基因的cDNA核心序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5’调控区。将所得序列与其它动物类群的β-肌动蛋白基因序列进行比较,并对其上游调控序列进行分析,旨在为进行定量RT-PCR提供可靠外标的基础数据,提高外标引物设计的正确性和特异性,同时也为转基因研究奠定理论基础。 本研究以市场购得新鲜鳜鱼、鳙鱼、胡子鲶、鲮鱼、斑鳢为材料分离肝脏组织,提取与纯化肝脏总RNA,通过逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)分别扩增出鳜鱼、鳙鱼、胡子鲶、鲮鱼、斑鳢β-肌动蛋白基因cDNA核心片段。再应用5’RACE和3’RACE技术快速扩增鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA末端,最终获得鳜鱼β-肌动蛋白基因全长cDNA序列。用Genome Walker方法克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5’调控区。实验得到鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA序列全长为1897bp,其中5’端非翻译区(5’-UTR)长94bp,3’端非翻译区(3’-UTR)长675bp,开放阅读框(ORF)为1128bp,编码375个氨基酸。所得鳙鱼β-肌动蛋白基因cDNA核心序列长为555bp,该cDNA序列包含1个开放阅读框架,编码185个氨基酸。所得胡子鲶β-肌动蛋白基因cDNA核心序列长为552bp,该cDNA序列包含1个开放阅读框架,编码184个氨基酸。所得鲮鱼β-肌动蛋白基因cDNA核心序列长为507bp,该cDNA序列包含1个开放阅读框架,编码169个氨基酸。所得斑鳢β-